Инфекционный перитонит кошек (FIP)

Что такое ФИП (FIP), инфекционный перитонит кошек, коронавирус кошек

Инфекционный перитонит кошек (FIP) — это смертельное заболевание, поражающее кошек и котят, инфицированных коронавирусом.

Коронавирус кошек передается от одного животного другому при контакте с инфицированными фекалиями.

Заражение может произойти, когда кошки вылизывают друг друга или когда они пользуются общими лотками, едят из одной миски, а также при использовании одних предметов ухода за шерстью для нескольких кошек.

Как коронавирус кошек вызывает инфекционный перитонит кошек?

Появление FIP связано с мутацией кошачьего коронавируса (FCoV). При заражении коронавирусом репликация вируса происходит в эпителиальных клетках дыхательного тракта и кишечнике. Начальная стадия коронавируса кошек обычно бессимптомна, но в редких случаях проявляется энтеритом лёгкой и средней степени.

Мутация коронавируса в вирусный перитонит чаще происходит после стрессовой ситуации в жизни кошки, сопровождающиеся снижением иммунного статуса организма.

Самые частые поражения – поражения печени, почек, селезенки, глазные поражения, мозговые и спинномозговые поражения.
FIP не заразен и не предаётся от кошке к кошке.

Формы заболевания кошачьего коронавируса (FCoV)

Коронавирусная инфекция у кошек и котят может принимать одну из двух форм:

• Влажная или выпотная форма
• Сухая форма
• Глазная форма
• Неврологическая форма

При «кишечной» форме вирус размножается в основном в кишечнике. Это может привести к возникновению диареи — особенно у котят, содержащихся вместе с другими кошками.

Ученым пока неизвестно, как именно этот более или менее безобидный вирус превращается в смертельно опасный патоген.

Каковы симптомы FIP?

У кошки или котенка с FIP развиваются различные симптомы, в том числе:

• повышение температуры тела
• рвота
• потеря аппетита
• диарея
• судороги

Может ли ветеринарный врач определить, есть ли у моей кошки FIP?

В настоящее время ветеринарным врачам доступны методы, позволяющие обнаружить присутствие коронавируса.

Какие анализы нужно сдать кошке при FIP

• общий анализ крови
• биохимический крови (альбумин, глобулин, соотношение альбумина к глобулину, общий белок, билирубин, АЛТ, АСТ)
• тест на лейкоз и иммунодефицит кошек
• УЗИ брюшной и грудной полости
• при выпотной форме — цитологическое исследование выпота и ПЦР исследование выпота на коронавирус кошек

Ветеринарный врач интерпретирует результаты анализов с осторожностью, анализируя множество других факторов, в числе которых условия содержания кошки или котенка, любые клинические признаки и результаты всех других проведенных тестов.

Как лечить FIP

Необходима помощь ветеринарного врача, который специализируется на лечении FIP

Успех лечения будет зависеть от:

• правильной диагностики FIP
• диагностики сопутствующих заболеваний
• лечения основного заболевания
• лечение сопутствующих заболеваний
• поддерживающей (симптоматической) терапии на всех этапах лечения

В течение всего периода лечения необходимо проводить контрольные исследования крови и УЗИ, чтобы отслеживать динамику и понимать, не развиваются ли у кошки сопутствующие заболевания.

Что такое GS-441524

Противовирусный препарат, разработанный компанией Gilead Sciences. 

Исследования группы ученых во главе с профессором Нильсом Педерсеном из Калифорнийского университета в Дэвисе показали, что против инфекционного перитонита кошек эффективен нуклеозид GS-441524, предшественник GS-5734 (Ремдесивир). Препарат, эфеективный в лечении некоторых  инфекций у людей, вызываемых РНК-вирусами (лихорадка Эбола) Препарат подавлял репликацию вируса и приводил к стойкой ремиссии заболевания. Исследования группы опубликованы в 2018 году в журнале «Ветеринарная микробиология» (Veterinary Microbiology, Volume 219, June 2018, Pages 226-233).

В 2019 г в Калифорнии прошёл симпозиум по FIP, на котором инфекционный перитонит кошек получил статус излечимого заболевания

В настоящее время множество ветеринарных специалистов применяют препарат GS-441524 и его аналоги (ингибиторы протеаз группы GS) для лечения кошек с инфекционным перитонитом и добиваются выздоровления питомцев.  
Масштабных достоверных исследований пока нет, как и нет статистики с большим количеством животных и достоверным процентом выздоровления.

В настоящее время разработка аналогичных противовирусных препаратов для клинического применения рассматривается как приоритетная задача для лечения FIP

Препарат GS-441524 представлен разными брендами — Mutian, Brava 

Дозировка GS-441524 рассчитывается, исходя из симптомов и веса животного. Инъекция болезненная. Полный курс инъекций — 84 дня.

Существует ли вакцина против FIP?

Вакцина против инфекционного перитонита кошек существует, но ее эффективность остается спорной темой.

Всех котят необходимо прививать против следующих заболеваний:

• «кошачий грипп» — герпесвирус кошек (FHV) и калицивирус кошек (FCV)
• вирус панлейкопении кошек (FPV)
• вирус лейкемии кошек (FeLV)

Поскольку FIP не относится к числу основных, или базовых, вакцин, против этого заболевания вакцинируют не всех котят и кошек.

Чтобы понять, какие вакцины необходимы вашей кошке, важно проконсультироваться с ветеринарным врачом. Он составит рекомендации на основе образа жизни котенка, проанализировав множество факторов, включая то, будет ли животное находиться на улице и контактировать с другими кошками.

---

Если вас беспокоит здоровье вашего котенка или у вас есть какие-либо вопросы о заболевании ФИП — запишитесь на прием к Ильясовой Ямиле Рахматулловне.

Коронавирус кошек

Коронавирус кошек

От 60 до 80% кошек имели контакт, либо были заражены коронавирусом.

 

Коронавироз кошек – вирусное заболевание, вызываемое пока еще малоизученным вирусом семейства Coronaviridae. Различают два основных вида коронавироза – Коронавирусный энтерит и Коронавирусный инфекционный перитонит кошек. (Подробнее про вирусный перитонит: Статья в Энциклопедии «Шанс Био») 

Вирус может вызывать серьезные последствия у животных вплоть до летального исхода.

Чаще всего коронавирусом заражаются молодые кошки, содержащиеся в питомниках.

Основной путь заражения – фекально-оральный, а для котят источником заражения становится их мать.

Коронавирус содержится в значительно высоком количестве в фекалиях зараженных особей. Сам процесс заражения происходит в момент вдыхания вируса, либо при его проглатывании. Коронавирус отличается устойчивостью, и очень легко распространяется, поэтому, даже находясь у лотка больного животного, здоровая кошка может заразиться. Вирулентность вируса высокая, поэтому для заражения достаточно небольшого его количества.

Механизм заражения. 

Стойкость вируса впечатляет: он может сохранять свою жизнеспособность в окружающей среде до семи недель

Вирус проникает в организм через рот, после чего происходит поражение эпителиальных клеток тонкого кишечника. Далее иммунная система кошек начинает активно работать над борьбой с вирусом, и в большинстве случаев здоровое животное справляется с ним. При этом, вирус может находится в организме без признаков заболевания в течение нескольких месяцев.

Коронавирус кошек не передается котятам через плаценту, а маленькие особи заражаются от матери в момент, когда уровень защитных антител в молоке становится меньше, и тогда организм становится более чувствительным. Происходит это в среднем в возрасте 5-7 недель.

Опосредованный путь передачи (перенос инфекции на предметах одежды, сумках и т.д.) крайне невелик, но возможен в случае непосредственного ее загрязнения зараженными фекалиями. 

Виды заболевания

Коронавирус кошек разделяют на два вида: 

FCoV – кишечный вирус.

FIPV – вирус, вызывающий инфекционный перитонит кошек. 

Оба вируса являются родственными по отношению друг к другу по антигенному составу, при этом FIPV является мутированным вирусом, который образуется в организме кошки после инфицирования кишечным вирусом под воздействием негативных факторов.

Вирус FCoV практически безопасен для здоровья кошек, так как здоровый организм справляется самостоятельно с ним. А вот при мутировании кишечного вируса в FIPV и развитии инфекционного перитонита вероятность летального исхода равна почти 100%. 

Несмотря на то, что оба вида вирусов имеют родственный состав, следует понимать, что коронавирусный энтерит и инфекционный перитонит – это абсолютно разные заболевания. Если кошка заболела кишечным вирусом FCoV, это не значит, что она заразится инфекционным перитонитом, и наоборот, FIPV не является осложнением FCoV. 

Симптомы коронавироза

Коронавирусный энтерит чаще всего протекает без ярко выраженных признаков. Отмечают кишечные расстройства (диарея, возможно со слизью или примесью крови), что происходит из-за поражения клеток тонкого кишечника. Возможна потеря веса, исчезновение аппетита. Обычно симптомы не вызывают каких-либо опасений, а прогноз заболевания благоприятный, за исключением случаев снижения иммунитета, вторичного инфицирования, либо наличия сопутствующих заболеваний в анамнезе.  

Инфекционный перитонит кошек. (Подробнее про вирусный перитонит: Статья в Энциклопедии «Шанс Био») Несмотря на то, что коронавирус мало опасен для животного, при определенных условиях он может мутировать в FIPV, и закончиться смертью животного. Основные признаки Инфекционного перитонита: напряжённость брюшной стенки и болезненность при пальпации живота; повышение температуры тела, быстрая потеря веса, снижение активности, накопление жидкости в брюшной полости (асцит), может наблюдаться желтушность слизистых оболочек, частое затрудненное дыхание.

Как правило, вирусный перитонит кошек в течение короткого времени (от нескольких недель до нескольких месяцев) приводит к летальному исходу. Однако при сильном иммунитете в некоторых случаях болезнь может перейти в стадию ремиссии (хроническое течение, при котором животное удовлетворительно себя чувствует). В этих случаях инфекция не выходит за пределы кишечных лимфатических узлов, здесь вирус подавляется и дальше не распространяется. Либо, процесс может перейти в гранулематозную стадию без выпота, так называемый, сухой перитонит. Заболевание при хроническом течении может давать рецидивы. Это объясняет, почему у пожилых кошек может развиваться FIP.

Диагностика коронавируса.

Лаборатория «Шанс Био» делает несколько исследований на коронавирусы кошек.

051 Антитела к коронавирусной инфекции кошек (ИФА)

Цель исследования: полуколичественное определение титра циркулирующих специфических антител класса G (Ig G) к коронавирусу кошек в сыворотке и плазме. Метод определения: модифицированный иммуноферментный анализ (dot ELISA) Материал: — кровь в пробирку для б/х или пробирку с ЭДТА 1-1,5 мл; — сыворотка/плазма 100 мкл; гемолиз не влияет Хранение пробы: — пробы цельной крови допустимо хранить одни сутки в холодильнике, — сыворотку/плазму – до 3-х дней в холодильнике;

007 Вирусный перитонит кошек (FIP) (ПЦР)

Цель исследования: выявление РНК коронавируса Требования к пробе: — венозная кровь в пробирке с антикоагулянтом ЭДТА — мин. объем — 1 мл. Плазму и эритроциты не разделять! — асцитная жидкость в стерильном контейнере без антикоагулянта- мин.объем — 0,5 мл — асцитная жидкость в стерильной пробирке с антикоагулянтом ЭДТА — мин.объем — 1 мл Будьте внимательны: — кровь с гепарином не подходит для исследований методом ПЦР! — кровь в пробирке для биохимии

140 Биохимическое исследование выпотов

Метод исследования: биохимический анализ выпотной жидкости Определяемые показатели: альбумин, глобулин, амилаза, холестерин, глюкоза, триглицериды, липаза, общий белок Требования к пробам: Выпотная (асцитная) жидкость может быть доставлена в лабораторию непосредственно в шприце или в пробирке для биохимии без активаторов свертывания. Минимальный объем — 0,5- 1 мл Хранение пробы: при +2-+8⁰С

801 Цитология выпотов, экссудатов/транссудатов (биохимия+ цитология) …. Выпотные жидкости подразделяются на транссудаты и экссудаты, модифицированные транссудаты. Основное отличие между различными видами выпота заключается в способе образования избытка жидкости в серозных полостях.  

141 Соотношение альбумин/глобулин (выпотная жидкость) Метод исследования: биохимический анализ выпотной жидкости Требования к пробам: Выпотная (асцитная) жидкость может быть доставлена в лабораторию непосредственно в шприце или в пробирке для биохимии без активаторов свертывания. Минимальный объем — 0,5 мл Хранение пробы: при +2-+8⁰С

Кроме того, необходимо проведение 

Биохимического исследования крови, 

Клинического анализа крови, 

УЗИ брюшной полости,

Электрокардиограммы.

Профилактика инфицирования коронавирусом

Борьба с вирусным перитонитом должна быть направлена прежде всего на его профилактику, в основном, предотвращение заражения котят кишечной коронавирусной инфекцией. Для этого требуется изоляция беременных кошек за 2 недели до родов, отлучение котят в возрасте 5 недель от матери и изоляция от остальных кошек; а в возрасте 6 месяцев — подтверждение лабораторным методом (ПЦР) отсутствия коронавируса в фекалиях животных.

 

Коронавирус COVID-19 и ваш питомец: что нужно знать

Как и любой другой обеспокоенный владелец домашнего животного, читая и слушая о коронавирусной инфекции, вы наверняка задумались о риске передачи инфекции от вас вашему питомцу и наоборот.

На текущий момент нет никаких доказательств того, что собаки, кошки, еда или пищевая упаковка были бы источником инфекции.

Однако есть информация, которую вам следует знать, относительно возможности заражения собак и кошек коронавирусом COVID-19. Всемирная ассоциация ветеринарии мелких животных (англ. World Small Animal Veterinary Association, WSAVA) опубликовала на своем официальном сайте очень полезный, регулярно обновляемый документ, доступный и на русском языке, который поможет разобраться в ситуации и даст ответы на конкретные вопросы.

Какие типы коронавируса поражают человека?

Центры профилактики и контроля заболеваемости (англ. Centers for Disease Control and Prevention, CDC) сообщают, что существует семь видов коронавируса, которые могут вызвать болезнь у человека. Четыре из них встречаются во всем мире и вызывают симптомы, похожие на вызванные простудой. Другие виды человеческого коронавируса являются более опасными для здоровья и включают в себя новый штамм SARS-CoV-2, который вызвал коронавирусную инфекцию COVID-19 (от англ. COrona VIrus Disease 2019).

Признаки коронавирусной инфекции у людей схожи с теми, что наблюдаются у больных гриппом, включая жар, вялость, апатию и кашель. Более сложные типы инфекций могут спровоцировать пневмонию, а также другие серьезные проблемы со здоровьем.

Стоит ли беспокоиться, если ваш питомец кашляет?

Если ваш питомец кашляет, у него повысилась температура тела, он выглядит вялым, то есть налицо все симптомы, которые диагностируют у людей с COVID-19, пожалуйста, незамедлительно обратитесь к ветеринарному врачу, так как подобные симптомы у питомцев вызывает множество других заболеваний: питомниковый кашель, в т.ч. парагрипп собак, астма кошек (острый респираторный синдром кошек), сердечная недостаточность, бронхит, пневмония и сердечная форма дирофиляриоза. И это лишь некоторые из них! Часть этих заболеваний может быть вызвана другими вирусами, которые никак не связаны с инфекцией COVID-19, и, согласно CDC, нет никакой информации о передаче вируса собачьего гриппа человеку.

Может ли человек передать COVID-19 своему домашнему питомцу?

Если вдруг тест на наличие инфекции COVID-19 у вас положительный, то в целях безопасности CDC рекомендует ограничить ваш контакт с людьми и животными. Это означает, что вы не должны делиться едой со своим питомцем, гладить, целовать его или позволять ему лизать себя. Если это возможно, попросите кого-нибудь позаботиться о вашем питомце, пока вы болеете. Если такой возможности нет, то носите маску для лица и одноразовые перчатки, мойте руки до и после прикосновения к домашнему животному.

Коронавирус у собак и кошек

Коронавирусы — это семейство вирусов. Свое название они получили из-за строения белков внешней оболочки, которые при рассмотрении под микроскопом напоминают солнечную корону.

На собак и кошек могут воздействовать иные, специфические для них виды коронавирусов, которые вызывают другие заболевания, такие как питомниковый кашель, респираторные инфекции и заболевания желудочно-кишечного тракта. Важно знать, что ни один из этих вирусов не связан с инфекцией COVID-19 и ни один из них не опасен для человека.

Недавние исследования показали, что кошки могут быть переносчиками COVID-19 для других кошек, но нет никаких доказательств того, что они могут передавать COVID-19 людям.

Что еще нужно знать о COVID-19?

Вот несколько важных замечаний о коронавирусной инфекции:

• Распространение COVID-19 от человека к человеку произошло во многих странах.
• В настоящее время нет никаких доказательств того, что вы можете передать COVID-19 своим питомцам или что ваши питомцы могут передать его вам.
• Правильная гигиена и мытье рук могут значительно снизить вероятность заражения и передачи заболевания.

Вирусные заболевания. Коронавирус кошек — Ветеринарная клиника «Эксвет» в Одессе

Коронавирусный энтерит и инфекционный перитонит кошек (ИПК, FIP)

Что надо знать владельцам и заводчикам?

Кошачьим коронавирусом болеют только представители семейства кошачьих. Собаки и люди не заражаются и не болеют кошачьим коронавирусом!

Коронавирус кошек очень заразен. Хорошо себя чувствует в среде, где много животных содержится в маленьком пространстве. Легко инактивируется большинством дезинфектантов, например, раствором хлора. ИПК мало заразен.

 Пути передачи: орофекальный — через общий лоток, интраназальный у котят — от матери.

После заражения коронавирусная инфекция может протекать по 2-м сценариям:
• коронавирусный энтерит — большая часть кошек с коронавирусом живут нормальной полноценной жизнью, 70-80% являются носителями вируса,
• инфекционный перитонит кошек (ИПК, FIP) — всегда смертельное заболевание.

Коронавирусный энтерит

Клинические признаки: диарея разной степени тяжести +/- рвота, задержка в росте, иногда хроническая диарея с кровью, тяжело поддающаяся лечению.
Диагностика: ПЦР-анализ фекалий.
Лечение: животные выздоравливают самостоятельно, при диарее применяют лечение симптоматическое +/- антибиотикотерапия.
Профилактика: контроль стресса, предотвращение скученности животных, регулярная чистка и обработка лотков.

Инфекционный перитонит кошек (ИПК, FIP)

Является мутировавшим коронавирусом.
Коронавирусная инфекция может вызывать инфекционный перитонит, а может и не вызывать. ИПК разовьется только у 1 из 10 животных, заболевших коронавирусом.  Провоцирующие факторы — стресс (переезд, новый человек, новый наполнитель, новый лоток, новый корм, изменение режима жизни владельца). Есть сухая и выпотная форма.  Выживаемость при сухой форме от 6 месяцев до 1 года, при выпотной — от 9 дней до нескольких месяцев.

Клинические признаки ИПК

СУХАЯ ФОРМА
• лихорадка, потеря веса, вялость, снижение аппетита, желтуха, одышка,
• поражение глаз: изменение цвета радужной оболочки, слепота, пятна на задней поверхности роговицы,
• неврологические симптомы: судороги, слепота, паралич, тик, тремор.

ВЫПОТНАЯ ФОРМА
• увеличение живота,
• одышка,
• возбуждение/ депрессия,
• лихорадка,
• анорексия, потеря веса, желтуха.

Диагностика

Инфекционный перитонит кошек — одна из самых сложных в диагностике болезнь, подтвердить или исключить диагноз крайне сложно. Проводятся такие исследования: анализ крови, титр АТ к коронавирусу, ПЦР выпотной жидкости, анализ выпота, УЗИ, рентген.

Профилактика ИПК в питомниках

• контролируйте стресс,
• избегайте содержания больших групп кошек или содержания нескольких пометов котят в одном месте,
• в идеале животных держать группами (по 4 кошки в каждой группе),
• изолируйте беременную кошку,
• организуйте карантин для новеньких,
• соблюдайте регулярную гигиену лотков и мисок,
• если у кошки в каждом помете хотя бы 1 котенок с ИПК, стерилизуйте ее.

 

виды, симптомы, лечение, анализы – Dr.Hug

Пандемия COVID-19 в последнее время стала одной из самых волнующих и обсуждаемых тем. Владельцев домашних животных интересует, есть ли случаи заражения вирусом COVID-19 кошек и собак, как проявляется заболевание у животных и что делать, если питомец недомогает.

 

Правда ли что летучие мыши – источник коронавируса?

Нынешняя коронавирусная эпидемия не первая за последние десятилетия. Науке известно несколько разновидностей этой инфекции, некоторые из них (229Е, NL43, HKU1, OC43) уже считаются обычными и выявлены не только у людей, но и у животных. Они достаточно легко переносятся организмом в виде респираторного заболевания. Против таких возбудителей ОРВИ разработаны лекарства. Считается, что некоторые виды коронавируса появившиеся за последние двадцать лет, имеют происхождение от летучих мышей. Например, вирус SARS-CoV, спровоцировавший вспышку атипичной пневмонии в 2002 году был выявлен у подковоносных летучих мышей, но считается, что передался человеку от пальмовых цивет. Коронавирус MERS-CoV (Middle Eastr espiratory syndrome), зарегистрированный в 2012 году в Саудовской Аравии, передался человеку через верблюда, но резервуаром вируса так же считаются летучие мыши.

 

Откуда взялся коронавирус (COVID-19)?

Коронавирусная инфекция 2019-nCoV считается очередным вариантом вируса, природным резервуаром которого являются летучие мыши, возможна произошла мутация одного из предшествующих вариантов коронавируса, но точных данных пока нет. Однако, ученым пока не удалось установить, как именно произошло первичное заражение человека.  Не исключаются несколько вариантов заражения новой инфекцией. В том числе рассматривается прямая передача инфекции. Ведь на рынках Китая легко можно купить не только жареные, но и сырые тушки летучих мышей. А именно в китайской провинции был зарегистрирован первый случай заражения COVID-19.

 

Коронавирус у животных: кто болеет и почему?

Как уже было сказано, ученые всего мира многие годы сталкиваются с заболеваниями, вызванными коронавирусом (семейство включает в себя 40 РНК содержащих видов вирусов). Ввиду того, что виды вируса делятся на подсемейства, не стоит опасаться коронавируса, которым болеют животные. К собачьим и кошачьим относят вирусы группы альфа. При этом, исследования микробиологов показывают, что собака не болеет “кошачьим” коронавирусом и наоборот. Наиболее подвержены заражению вирусами животные с ослабленным иммунитетом, щенки и котята.

 

Чем отличается коронавирус кошек?

Кошки могут болеть вирусом в двух формах – коронавирусный энтерит и инфекционный перитонит. Причем, инфекционный перитонит – это мутация коронавирусного энтерита. Инфекционный перитонит кошек может вызывать серьезные последствия, вплоть до летального исхода. Чаще всего коронавирусной инфекции подвержены бездомные животные и обитатели питомников, так как вирус передается фекально-оральным путем при скученном содержании или частых контактах с разными кошками. Домашние животные могут “поймать” вирус во время прогулок. Кишечный коронавирусный энтерит практически безопасен для здоровых взрослых кошек. Может проявляться легкими расстройствами желудочно-кишечного тракта. В большинстве случаев после переболевания вирус выводится или переходит в бессимптомную форму.

Но если дома много кошек и котят, и они постоянно перезаражают друг друга, риск мутации вируса в инфекционный перитонит сильно возрастает.

Коронавирусный инфекционный перитонит характеризуется поражением почти всех систем органов. Среди симптомов – повышение температуры, резкая потеря веса, утомляемость, скопление жидкости в брюшной полости, анемия. Подтвердить диагноз очень трудно, нужно полное обследование животного – УЗИ органов брюшной полости, расширенные анализы крови, анализ жидкости из живота, иногда даже биопсия измененных органов.

 

Коронавирус у собак: диагностика, лечение и профилактика.

Коронавирусная инфекция у собак делится на 2 типа: кишечная и респираторная. Первый тип вируса опасен тем, что разрушает клетки кишечника и кровеносных сосудов, передается при контакте с носителем инфекции (при совместных играх, обнюхивании). Респираторный коронавирус у собак схож с простудой у людей, передается только воздушно-капельным путем, чаще всего заражение происходит в питомниках.

Своевременное обращение к врачу позволяет быстро и полностью вылечить животное. К сожалению, владельцы собак редко обращают внимание на первые симптомы (потеря аппетита, вялость). Обращаются к ветеринарным врачам чаще с такими симптомами: рвота, обезвоживание, кровавая диарея. Это свидетельствует о том, что питомец уже в тяжелом состоянии. Часто коронавирус диагностируется вместе с парвовирусом. В таких случаях основным патогеном («виновником» болезни) считается именно парвовирус, так как он намного опаснее и может приводить даже к летальному исходу. Кишечный коронавирус часто обнаруживается у клинически здоровых собак.

 

Анализы животным на коронавирус в Москве.

Специфического лечения коронавируса у собак и кошек не существует. Для выявления заболевания при появлении первых симптомов проводятся анализы крови, УЗИ, так же существуют экспресс-тесты для быстрого выявления вируса. Сделать анализы животным в Москве можно в нашем ветеринарном центре. На основании анализов врач назначает симптоматическое лечение и препараты для общего укрепления организма, при необходимости направляет в стационар. В большинстве случаев при своевременном обращении эти меры приводят к скорейшему выздоровлению питомца.

 

Передается ли коронавирус от собаки и кошки человеку ?

«Собачий» и «кошачий» коронавирус безопасен для человека. Не было зафиксировано ни одного заражения человека FCoV или CCoV. COVID 19 относится к подсемейству бета-коронавирусов. И он имеет отличия в строении от коронавируса собак или кошек.

Несмотря на безопасность альфа-коронавирусов для человека, не забывайте о правилах гигиены, когда ваш питомец заболел. Тщательно мойте руки с мылом после контакта с животным, делайте влажную уборку, изолируйте больное животное. Не забывайте, что есть риск заражения других собак и кошек и распространения вируса на одежде и обуви.

По данным Всемирной организации здравоохранения до сих пор не зафиксированы случаи, подтверждающие, что домашние кошки и собаки могут заразиться новым типом коронавирусной инфекции 2019-nCoV.

 

Профилактика коронавируса у домашних животных.

Будьте внимательны к своим питомцам во время прогулки, старайтесь ограничить общение собак с незнакомыми животными и их фекалиями.

Соблюдайте правила гигиены. После прогулки тщательно мойте лапы своему питомцу.

Не забывайте о профилактической вакцинации любимца. Хоть на данный момент нет вакцины от коронавируса, но есть от более опасных заболеваний, таких как парвовирусный энтерит собак, панлейкопения кошек, чума плотоядных и бешенство.

Любите своих питомцев и при первых проявлениях любого заболевания обращайтесь к ветеринарному врачу!

 

Коронавирус домашних животных передается человеку?

Несмотря на то, что коронавирусы относятся к одному семейству, на микроскопическом уровне они отличаются. Именно эти отличия не позволяют вирусу человека жить и размножаться в организме домашних животных. Такая же картина со штаммом коронавируса домашних питомцев: микроскопические изменения лишают вирус возможности существовать в организме человека.

Защитники животных и врачи по всему миру призывают владельцев домашних животных не поддаваться панике и не верить слухам. Такие призывы стали возникать после того, как во Франции, в связи с распространением ложной информации, люди стали бросать домашних животных на улице, сдавать в приюты и даже усыплять.

 

Могут ли домашние животные заболеть коронавирусом COVID-19?

Согласно данным Роспотребнадзора случаи передачи вируса COVID-19 человеку от домашних животных не зафиксированы, равно как и случаи заражения собак и кошек новым типом инфекции.

Собака из Гонконга, у которой тест на COVID19 был положительным, не является доказательством возможности заражения домашних животных. По мнению ученых, собака контактировала с зараженным человеком, вирус попал ей на слизистые. Ввиду того, что вирус способен долгое время жить на поверхностях, первый тест оказался положительным. Повторные исследования показали, что собака не болела новым коронавирусом.

Россельхознадзор назвал симптомы COVID-19 у домашних животных

Коронавирус SARS-CoV-2, вызывающий болезнь COVID-19, способен поражать не только человека, но и домашних животных, говорится в материале, подготовленном специалистами подведомственных Россельхознадзору ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» и ФГБУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов».

Ученые отмечают, что COVID-19 могут заражаться и самые популярные домашние питомцы — собаки и кошки. Но если собаки, как правило, переносят болезнь легко, без явных симптомов, то у кошек проявлялись признаки острой респираторной инфекции.

«В частности, у животного фиксировали повышенную температуру, кашель, чихание, истечения из носовой полости и глаз. У отдельных животных наблюдались признаки острой кишечной инфекции, сопровождавшейся рвотой и диареей», — говорится в сообщении Россельхознадзора.

Согласно данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) и Всемирной организации здравоохранения животных (МЭБ), фактов заражения людей COVID-19 от собак и кошек пока не выявлено, нет и доказательств возможности такого заражения. Однако возможность передачи COVID-19 воздушно-капельным путем от одной кошки к другой учеными подтверждена, поэтому в Россельхознадзоре рекомендуют исключить тесные контакты между домашними животными в тех местах, где выявлено много случаев заражения коронавирусной инфекцией.

Кроме того, ведомство советует сократить контакты с домашним любимцем тем, кто сам заболел COVID-19. В частности, рекомендуется, чтобы больной человек не кормил животное и не ухаживал за ним, не гладил кошку или собаку и не давал той лизать себе руки и т.д.

Необходимости в массовом тестировании домашних животных на COVID-19 в Россельхознадзоре не видят, однако рекомендуют проверять кошек и собак, тесно контактировавших с больным либо проявляющих клинические признаки респираторного заболевания.

«Решение о тестировании животных принимается представителями государственной ветеринарной службы субъекта РФ или владельцем животного после консультации с ветеринарным врачом», — говорится в сообщении ведомства.

Для проверки животных на COVID-19 используются разработанные учеными Россельхознадзора тест-системы, выявляющие вирус методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Животное, у которого подтверждено заболевание, должно быть изолировано, ему назначается противовирусное и симптоматическое лечение вплоть до выздоровления.

Ветеринары рассказали, опасен ли COVID-19 для кошек и собак — Российская газета

Ветеринары нередко предлагают владельцам кошек и собак сделать животному тест на коронавирус. Дело в том, что кошки, например, могут быть бессимптомными носителями коронавируса, который по непонятным пока науке причинам примерно в 11 процентах случаев мутирует в вирус инфекционного перитонита, приводящий к их гибели. У собак тоже есть «свой» коронавирус который вызывает диарею, хорошо поддающуюся лечению. А как насчет нового коронавируса COVID-19? Могут ли заболевшие владельцы «поделиться» с питомцем COVID-19, и, наоборот, способны ли кошки и собаки инфицированного владельца участвовать в распространении нового вируса?

Международная ветеринарная организация мелких домашних животных WSAVA (точнее, ее научный комитет) в феврале 2020 года опубликовала официальные рекомендации для владельцев животных, в которых указывается, что нет доказательств того, что животные-компаньоны могут заражаться или распространять COVID-19.  Хотя имеющиеся данные позволяют предположить, что этот вирус имеет животное происхождение. В настоящее время проводятся исследования для определения животного источника и установления потенциальной роли животного-резервуара для этой болезни. Но достаточные научные данные для объяснения пути передачи от животного источника людям отсутствуют.

Но, по мнению специалистов, существует вероятность того, что некоторые животные могут заразиться через близкий контакт с инфицированными людьми. На сегодняшний день известно о двух собаках, которые оказались положительными по COVID-19 после близкого контакта с инфицированными людьми. По данным департамента сельского хозяйства, рыболовства и охраны природы Гонконга (AFCD), померанский шпиц зараженной пациентки после рутинного тестирования дал «слабо положительный» результат на COVID-19. Собака без клинических признаков болезни была помещена в карантин, и 14 марта, после повторного отрицательного теста на коронавирус возвращена хозяйке. 16 марта собака умерла по неизвестной причине. Известно, что сама 60-летняя владелица шпица выздоровела.

В конце марта в Гонконге выявили еще один случай положительного теста на коронавирус у собаки, владелец которой оказался положительным по COVID-19. Собака так же не имеет клинических признаков болезни, помещена в карантин.

В настоящий момент отсутствуют доказательства того, что собаки заболевают или могут играть определенную роль в распространении данной болезни человека. Однако, если у человека подтвержден коронавирус, WSAVA рекомендует все же ограничить его контакт с домашними животными. А если ухаживать за животным больше некому, владельцу следует мыть руки до и после общения с ним и носить маску.

Несмотря на имеющуюся неопределенность в отношении происхождения вируса COVID-19 Всемирная организация здравоохранения рекомендует соблюдать общие меры гигиены при посещении рынков живых животных или рынков продуктов животноводства, а именно: после контакта с животными и продуктами животноводства регулярно мыть руки с мылом, избегать касания руками глаз, носа или рта, а также избегать любых контактов с потенциально загрязненными отходами животноводства или жидкостями на земле или постройках рынков. На эту рекомендацию хочется обратить внимание владельцев, любящих угощать своих питомцев сырым мясом или рыбой.

Что касается вакцинации собак от коронавируса — по данным WSAVA в настоящее время на рынке нет вакцин против респираторной коронавирусной инфекции у собак. Вакцины против коронавируса собак, доступные на рынках некоторых стран (в России их нет), предназначены для защиты от кишечной коронавирусной инфекции и не лицензированы для защиты от респираторных инфекций. Поэтому ветврачам не рекомендуется использовать такие вакцины в связи с текущей вспышкой: нет абсолютно никаких доказательств того, что вакцинация собак коммерчески доступными вакцинами обеспечит перекрестную защиту против инфекции, вызванной COVID-19, поскольку кишечные и респираторные вирусы являются совершенно различными вариантами коронавируса.

И, самое важное, в рекомендациях Всемирной организации по охране здоровья животных (МЭБ) особо подчеркивается важность того, что COVID-19 не должен повлечь за собой принятие неприемлемых мер в отношении домашних или диких животных, которые могут поставить под удар их благополучие и здоровье.

Как лечить коронавирус у кошек

Коронавирус — это термин, используемый для описания инфекции, вызванной разными штаммами этого вируса, но разные виды животных поражаются разными типами коронавирусов. Важно знать, какой тип коронавируса может заразиться кошка и что вы можете сделать, чтобы обезопасить свою кошку.

Заразен ли коронавирус кошек для людей (и наоборот)?

Коронавирус кошек — это не тот тип коронавируса, который вызывает респираторные проблемы у людей.Это разные штаммы вируса, и до сих пор неизвестно, как кошки могут быть затронуты или не затронуты респираторным коронавирусом человека (SARS-CoV-2, ранее называвшийся 2019-nCoV, вызывающий COVID-19). В апреле 2020 года крупная ветеринарная лаборатория IDEXX сообщила, что проверила более 5000 образцов вируса COVID-19 от кошек, собак и лошадей с респираторными симптомами в 17 странах и не дала положительных результатов. IDEXX приходит к выводу, что это говорит о том, что собаки и кошки, живущие с инфицированными людьми, обычно остаются неинфицированными, за исключением редких и единичных случаев. Взаимодействие с другими людьми

Кошки могут быть восприимчивы к заражению COVID-19 от владельцев домашних животных, но небольшое количество кошек, у которых был положительный результат теста, не протекали бессимптомно или проявляли легкие симптомы. Также нет доказательств того, что кошки могут передавать болезнь людям, только другим. кошки, и очень редко у кошек в целом положительный результат теста. Еще многое предстоит узнать об этом вирусе и о том, как он может повлиять на кошек и других домашних животных, поэтому Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) рекомендуют, если вы инфицированы COVID-19, избегать или ограничивать контакты с вашими домашними животными до тех пор, пока об этом вирусе известно больше.

COVID-19 и животные

Хотя есть несколько задокументированных случаев, когда животные давали положительный результат на COVID-19, вирус, похоже, не оказал серьезного воздействия на животных. Риск заражения людей COVID-19 животными считается низким.

Ящиков в США:

• Тигр и лев в Нью-Йорке, апрель 2020 г.
• Две домашних кошки в Нью-Йорке, апрель 2020 года
• Собака в Северной Каролине, апрель / май 2020 г.

Другие страны:

• Две собаки в Гонконге, март 2020 г.
• Кот в Бельгии, март 2020
• Две норковые фермы в Нидерландах, апрель 2020 г.
• Две домашних кошки во Франции, май 2020 г.
• Домашняя кошка в Испании, май 2020
• Домашняя кошка в Германии, май 2020 г.
• Собака и кошка в Нидерландах, май 2020 г.
• Кот в России, май 2020

Некоторые из этих животных действительно заболели.Считается, что большинство из них заразились вирусом от инфицированных людей. На сегодняшний день нет никаких доказательств того, что животные могут передавать COVID19 человеку.

Что такое коронавирус у кошек?

Коронавирус кошек (FCoV) — это вирусное заболевание, которое вызывает диарею у кошек, но также может приводить к более серьезному заболеванию, называемому инфекционным перитонитом кошек (FIP). Из-за риска развития FIP коронавирус кошек представляет собой опасный вирус.

Признаки коронавируса у кошек

• Диарея
• Вздутие живота
• Затрудненное дыхание
• Вялость
• Похудание
• Отсутствие аппетита
• Пожелтение кожи и / или глаз
• Повышенная жажда
• Учащенное мочеиспускание
• Рвота

Иногда коронавирус кошек может вызывать у кошек тяжелую диарею, но чаще всего это очень легкая форма, если это не штамм, связанный с FIP.

У кошек со штаммом кошачьего коронавируса, который может вызвать FIP, есть более серьезные симптомы. Снижение активности и аппетита не редкость у любой кошки, которая плохо себя чувствует, и если ее не лечить, кошка с коронавирусом может начинают худеть и рвать. FIP может вызвать скопление жидкости в брюшной полости и груди, поэтому, если коронавирус вызвал влажную форму этого заболевания, у кошки будет вздутие живота или потенциально затрудненное дыхание. Наконец, если FIP от коронавируса вызвал повреждение органов, может возникнуть пожелтение кожи и глаз, если поражена печень, и может наблюдаться усиление жажды и мочеиспускания при поражении почек.

Причины коронавируса у кошек

Различные штаммы кошачьего коронавируса могут вызывать это заболевание у кошек, и исследователи не уверены в точном пути передачи. Они знают, что он передается от кошки к кошке, но это распространение может происходить через фекалии, слюну и даже мочу, что делает его очень заразным между кошками.

Диагностика коронавируса у кошек

После того, как будет собран полный анамнез и ветеринар проведет физикальное обследование вашей кошки, будет взят образец фекалий для выявления паразитов, избыточного роста бактерий и токсинов, а также других микроскопических причин диареи.

Анализы крови и рентгеновские снимки также могут быть выполнены, если болезнь достаточно серьезна, чтобы исключить другие заболевания или искать изменения, которые могут указывать на то, что у кошки есть FIP. Если подозревается форма коронавируса FIP и в брюшной полости или груди кошки присутствует чрезмерное количество жидкости, можно также получить образец жидкости для проведения специального теста на FIP. В целом, получить его сложно. окончательный диагноз коронавируса из-за неточных результатов тестов и невозможности дифференцировать различные штаммы коронавируса, которые вызывают или не вызывают FIP.Из-за этого диагноз обычно ставится на основании симптомов кошки.

Лечение коронавируса у кошек

Коронавирус, вызывающий диарею, просто лечится симптоматически с помощью лекарств и добавок для уплотнения стула, но коронавирус, вызывающий FIP, не поддается лечению так же легко. Лекарства от FIP нет, поэтому симптомы контролируются до тех пор, пока качество жизни кошки остается хорошим.

Как предотвратить коронавирус у кошек

Поскольку коронавирус у кошек очень заразен, важно держать ваших кошек подальше от кошек, у которых он есть.Если у вашей кошки коронавирус, вам также следует воздерживаться от привоза новых кошек, пока они не скончались, и избавиться от всего, что использовала кошка, особенно от кошачьих туалетов, прежде чем заводить новую. Избавиться от вируса в окружающей среде может быть очень сложно, особенно если он был заражен несколькими кошками, поскольку никто точно не знает, как он распространяется.

Вакцина против FIP доступна для кошек, но ее использование и эффективность неоднозначны. Обсудите плюсы и минусы этой вакцины со своим ветеринаром.

FIP имеет лекарство! Вот почему так сложно заболеть

Инфекционный перитонит кошек (FIP) — болезненное неизлечимое заболевание, которое почти всегда заканчивается смертельным исходом. Но за последние 18 месяцев, как сообщается, тысячи кошек были излечены от FIP с помощью препарата, очень похожего на ремдесивир — противовирусного препарата, который в настоящее время исследуется в качестве многообещающего средства лечения COVID-19 у людей. Как объясняется в недавней статье в Atlantic , успех ремдесивира оказался основной причиной, по которой вы, вероятно, даже не знали, что существует лекарство от FIP.

Инфекционный перитонит у кошек

Коронавирус кошек (собирательный термин для нескольких вирусных штаммов) поражает 40–80% всех кошек во всем мире. Это наиболее часто встречается у кошек в возрасте до двух лет, обычно вызывает лишь легкую диарею или вообще не вызывает симптомов и обычно проходит по мере взросления молодых кошек и выработки иммунитета. (Кошачий коронавирус является одним из многих патогенов, которые AnimalBiome проверяет при выборе здоровых животных-доноров для добавок для трансплантации фекалий.Главный научный сотрудник Холли Ганц описывает кошачий коронавирус как «широко распространенный» среди молодых кошек. Кошки, образцы фекалий которых дали положительный результат на коронавирус кошек, исключаются из донорской программы AnimalBiome.)

Но в 5-10% случаев в вирусе происходит мутация, вызывающая гораздо более серьезное заболевание — инфекционный перитонит кошек, или FIP. В этих случаях мутировавший вирус поражает лейкоциты кошки, которые переносят инфекцию по всему телу, вызывая интенсивный ответ иммунной системы.Возникающее в результате воспаление может нанести ущерб кишечнику, мозгу и другим органам.

ФИП встречается в двух формах: «сухой» (нераспространенный) и «влажный» (эффузивный). Сухая форма может вызвать потерю аппетита, потерю веса, депрессию и лихорадку. Влажная форма вызывает скопление жидкости в брюшной полости или грудной полости, что приводит к появлению пузатого вида и иногда мешает кошке дышать. Любая форма также может привести к неврологическим симптомам, таким как судороги или потеря координации.Обе формы смертельны, и отсутствие лекарства поставило родителей домашних животных и ветеринаров в душераздирающее положение, у которых нет другого выхода, кроме эвтаназии.

Лечение смертельной болезни кошек

Нильс К. Педерсен, ныне почетный профессор Школы ветеринарной медицины Калифорнийского университета в Дэвисе, изучает FIP с 1960-х годов. В 2018 и 2019 годах он протестировал недавно разработанный противовирусный препарат, известный как GS-441524, в качестве потенциального лечения. Аппарат Atlantic недавно сообщил о новаторских результатах Педерсена: GS-441524 успешно вылечил естественный FIP у 25 из 31 кошки в полевых испытаниях — «скорость выздоровления неслыханная».

Разработанный фармацевтической компанией Gilead Sciences, GS-441524 уничтожает вирусы, блокируя их способность к репликации. Внеся небольшое изменение, которое улучшило способность молекулы проникать в клетки человека, компания Gilead также создала второй, почти идентичный препарат — ремдесивир.

В то время как компания Gilead рассматривала ремдесивир как возможное средство лечения лихорадки Эбола у людей, Педерсен тестировал более простой препарат GS-441524 на кошках. В сотрудничестве с собственными исследователями Gilead он показал, что GS-441524 излечивает FIP «безопасно и эффективно».

Но, как объясняется в статье Atlantic , эта долгожданная победа над FIP быстро превратилась в тупик.

Компания Gilead отказалась выдать лицензию GS-441524 для использования на животных.Компания работала над одобрением FDA ремдесивира для лечения лихорадки Эбола и опасалась, что исследования GS-441524 на кошках могут помешать разрешению ремдесивира для использования человеком.

Связь с COVID-19 Трехмерная иллюстрация вируса, вызывающего COVID-19.

Вирус, вызывающий FIP, — это коронавирус. Коронавирусы — это большое, широко распространенное семейство вирусов, которые эволюционировали в течение долгого времени, чтобы заразить почти все виды животных.Многие из этих вирусов стали специализированными, приспособившись заражать только один вид. Коронавирус, вызывающий FIP, поражает только кошек. Некоторые коронавирусы специализируются на людях; некоторые из них, например, вызывают простуду.

Самый известный коронавирус на данный момент — это SARS-CoV-2, вызывающий COVID-19. Этот конкретный коронавирус, похоже, возник у летучих мышей и только недавно был передан людям. (Хотя люди не могут заразиться FIP, было несколько случаев, когда кошки заразились COVID-19 от людей.)

К началу пандемии COVID-19 ремдесивир оказался неэффективным для лечения лихорадки Эбола. (Как объясняется в статье Atlantic : «Вирус, вызывающий Эбола, не является коронавирусом, но ремдесивир необычайно широко действует для противовирусного препарата, и первые результаты против Эболы были многообещающими».)

Но затем ремдесивир показал себя многообещающим против COVID-19 у людей. Препарат все еще проходит клинические испытания, но уже получил разрешение от FDA на экстренное применение в тяжелых случаях.

Черный рынок

Тем временем лекарство от FIP наконец-то появилось, но из-за того, что Gilead отказалась лицензировать его, отчаявшиеся родители домашних животных и ветеринары по всему миру не имели законного способа получить его. Спрос был особенно велик в Китае, где, как отмечает Педерсен, «инфекционный инфекционный перитонит кошек также является серьезной проблемой для домашних кошек». Китайские производители начали производить нелицензионный GS-441524, и черный рынок этого препарата быстро вырос.

В США находчивые родители домашних питомцев нашли друг друга и создали группы в Facebook, такие как FIP Warriors, для обмена информацией о том, как приобретать и управлять GS-441524 на черном рынке.

Хотя он поддерживает родителей домашних животных, которые прибегают к этому пути, Педерсен также хочет, чтобы они знали о недостатках. Препарат «дорого обходится, вызывает стресс у владельцев и кошек, требует надлежащего наблюдения и не всегда эффективен», — предупреждает он.Стандартное лечение предполагает ежедневные подкожные инъекции в течение 12 недель. А кошкам с неврологическим FIP «часто требуется еще более высокая дозировка».

Тем не менее, с тех пор, как Педерсен впервые опубликовал свои результаты в 2019 году, все больше и больше родителей домашних животных выбирают черный рынок, в результате чего тысячи кошек были вылечены с помощью GS-441524.

История Салема Кот Салем был очень болен, когда начал лечиться от FIP.

Салем — одна из тех счастливчиков. Усыновленный 10-месячным бездомным, Салем спустя месяц был диагностирован с FIP. Его приемная, Дана, узнала о GS-441524, потому что у ее ветеринара был еще один клиент, которому удалось получить лекарство из Китая. Через этого клиента и группу FIP Warriors Дана приобрела препарат и начала лечить Салема.

«Мне повезло, что у меня был поддерживающий ветеринар», — говорит она. Лечение необходимо контролировать с помощью повторных анализов крови, чтобы убедиться в правильности дозировки.Дана говорит: «Каждый раз, когда нам нужно было сдавать кровь, мой ветеринар заставлял техников делать укол Салему, чтобы дать мне перерыв». Ежедневные инъекции были трудными. Раствор густой и требует большой иглы; препарат также «довольно кислый, — говорит Дана, — так что кошке это действительно неудобно».

Примерно через месяц после начала лечения симптомы Салема снова ухудшились, и его дозу пришлось увеличить. Чтобы убедиться, что он прошел достаточно недель при более высокой дозировке, Дана продлил курс лечения, который в итоге занял 105 дней подряд.

По состоянию на конец мая у Салема была ремиссия в течение 84 дней, «что является критерием для того, чтобы считать кошку излеченной», — говорит Дана. «Моя теория состоит в том, что он так рано заболел, что так и не научился быть настоящей кошкой, пока мы не закончили лечение». Но теперь Салем «прыгает на вещи, наблюдает за птицами на улице, кричит на меня, требуя еды и домашних животных, и любит преследовать и нападать на людей в доме».

‍

Салем на 84-й день ремиссии после лечения от FIP.

«Это был невероятно утомительный и дорогостоящий процесс, — говорит Дана, — но я бы сделала это снова без вопросов, потому что он вернул мою кошку к жизни».

Поскольку GS-441524 не был лицензирован для использования на животных, ветеринары не могут по закону назначать, приобретать или вводить препарат. Но, по словам Педерсена, «очень важно, чтобы у владельцев был доступ к личному ветеринару, который знает о FIP, чтобы было подтверждено, что кошка страдает от FIP, а не от другого заболевания, и чтобы ветеринары помогали с лечением, чтобы гарантировать правильное введение. препарат и правильный мониторинг ответа.”

Для получения более конкретных рекомендаций Педерсен направляет родителей домашних животных и ветеринаров к своей статье 2019 года в журнале Journal of Feline Medicine and Surgery , «в которой описывается препарат, как его вводить и как следует контролировать лечение». Статья находится в открытом доступе и может быть загружена бесплатно.

Будущее

Черный рынок сыграл важную и спасительную роль, так как лекарство от FIP было невероятно недосягаемым для закона. Но даже этот вариант может длиться недолго. По словам Педерсена, «этим поставщикам черного рынка было дано распоряжение о прекращении и воздержании от патентообладателя, Gilead Sciences, Inc.», поэтому нет никаких гарантий, что этот «неутвержденный источник GS-441524» будет продолжать существовать в стране. будущее.

С другой стороны, если ремдесивир получит одобрение FDA для более широкого применения у людей, ветеринары должны иметь возможность получить его на законных основаниях для применения у кошек «вне маркировки». Хотя Педерсен предупреждает, что «безопасность и эффективность ремдесивира для лечения FIP не установлены», он почти идентичен GS-441524.

Еще один противовирусный препарат продемонстрировал некоторую эффективность против FIP — ингибитор вирусной протеазы под названием GC376, разработанный в Университете штата Канзас. Исследования показали, что этот препарат менее эффективен, чем GS-441524, но в 2018 году он был лицензирован ветеринарной биотехнологической компанией Anivive Lifesciences для коммерческой разработки. Доступ к GC376 мог бы, по крайней мере, дать родителям домашних животных путь законного лечения, но в марте Anivive объявила, что работает с FDA, чтобы перепрофилировать препарат в качестве кандидата для лечения COVID-19 у людей.

Подробнее о FIP и GS-441524:

• SOCK FIP (Спасите наших кошек и котят от кошачьего инфекционного перитонита), добровольная некоммерческая организация

000

Если вам понравилась эта статья, поделитесь ею.

‍

кошек указывают путь к потенциальным лекарствам от COVID-19

На прошлой неделе Gilead Sciences сообщила, что протестирует свой лекарственный препарат от COVID-19 ремдесивир против родственного соединения в своей библиотеке под названием GS-441524 в испытаниях на животных после тщательной проверки последнего препарата. , который в течение многих лет использовался для лечения инфекционного перитонита кошек (FIP), несмотря на то, что он не был лицензирован для этого использования.

Сейчас другой калифорнийский биотехнолог, Anivive Lifesciences, работает над противовирусным препаратом COVID-19, вдохновленным кошками, и у него есть новые результаты доклинических исследований, подтверждающие этот проект.

Ученые из Университета Альберты сообщили, что препарат, разработанный для лечения коронавируса, который может вызывать FIP, ингибирует основную протеазу как SARS-CoV, так и SARS-CoV-2. Это помешало человеческим коронавирусам размножаться в культурах клеток, сообщили они в журнале Nature Communications.

Anivive первоначально лицензировала препарат под названием GC376 в Университете штата Канзас в 2018 году и с тех пор работает над его разработкой в ​​качестве противовирусного средства для лечения FIP, прогрессирующего заболевания у кошек, которое часто вызывается коронавирусом и приводит к летальному исходу, если его не лечить. В прошлом месяце Anivive заявила, что начала два доклинических исследования, чтобы определить, может ли GC376 лечить COVID-19.

СВЯЗАННЫЙ: COVID-19: новые данные о животных подтверждают ремдесивир Gilead по мере появления других кандидатов на лечение

GC376 был разработан для ингибирования протеазы 3C, которая способствует репликации нескольких коронавирусов, заражающих животных и людей.К ним относится коронавирус кошек (FCoV), который обычно вызывает у кошек легкие симптомы, но может привести к FIP.

Два пилотных исследования GC376 на домашних кошках, инфицированных FIP, показали, что препарат эффективен против болезни в течение двух недель и хорошо переносится. Anivive в настоящее время увеличивает производство препарата для более крупных исследований на кошках.

Для нового исследования команда Университета Альберты проверила как GC376, так и его исходный препарат, GC373, на их способность ингибировать протеазу 3C.По их словам, оба препарата блокировали репликацию вируса.

Авторы признали, что вакцины против COVID-19 быстро развиваются, но они предположили, что противовирусные препараты все еще необходимы в краткосрочной перспективе. SARS-CoV-2 »- это вирус со значительной частотой мутаций. Кроме того, у некоторых пациентов вирус сохраняется более 2 месяцев с некоторой вероятностью повторного заражения », — написали они в исследовании.

М. Джоан Лемье, доктор философии, профессор структурной биологии в Университете Альберты, указала в интервью Genetic Engineering & Biotechnology News, что GC376 может быть быстро продвинут для испытаний на людях, учитывая его послужной список в ветеринарии.

«Поскольку этот препарат уже использовался для лечения кошек с коронавирусом, и он эффективен, практически не токсичен, он уже прошел [доклинические] стадии, и это позволяет нам двигаться вперед», — сказал Лемье.

Как два препарата от коронавируса для кошек могут помочь людям в борьбе с COVID-19

В стремлении найти лекарства против COVID-19 исследователи изучают множество возможностей, даже лекарства, используемые для спасения жизни кошек.

Кошки могут заразиться почти всегда смертельной болезнью, вызванной коронавирусом, поражающим только кошек. Теперь предварительные исследования показывают, что два экспериментальных препарата, которые могут вылечить это заболевание у кошек, называемое кошачьим инфекционным перитонитом, могут помочь в лечении людей, инфицированных SARS-CoV-2, коронавирусом, стоящим за пандемией.

В лабораторных экспериментах один из препаратов, названный GC376, отключает ключевой фермент, который некоторые коронавирусы, включая SARS-CoV-2, используют для репликации. Другой, названный GS-441524, является противовирусным родственником ремдесивира, первого препарата, ускоряющего выздоровление людей от SARS-CoV-2 в клинических испытаниях ( SN: 4/29/20 ).

«Оба препарата оказались очень эффективными при лечении кошек с инфекционным перитонитом кошек и, как правило, без каких-либо других форм лечения», — говорит Нильс Педерсен, ветеринар, изучающий кошачий коронавирус в Калифорнийском университете в Дэвисе. Однако ни один из препаратов не был одобрен Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США для использования у кошек, не говоря уже о людях.

Подпишитесь на рассылку по электронной почте последних новостей и исследований о коронавирусе

Хотя у большинства животных с кошачьим инфекционным перитонитом симптомы не проявляются, у некоторых кошек может развиться тяжелое заболевание, если вирус мутирует и заразит определенный тип иммунных клеток.Когда это происходит, коронавирус распространяется по всему телу кошки, вызывая смертельную воспалительную реакцию, которая может вызвать паралич или скопление жидкости в легких.

В этом отношении кошачий коронавирус похож на SARS-CoV-2. И тяжелая форма COVID-19 у людей, и случаи инфекционного перитонита у кошек вызваны дисфункциональным воспалительным иммунным ответом, говорит Джули Леви, ветеринар из Университета Флориды в Гейнсвилле.

GC376 работает, не позволяя ключевому ферменту под названием М-протеаза, который содержится в ряде различных коронавирусов, расщеплять длинные цепочки вирусных белков.РНК-вирусы, такие как SARS-CoV-2, часто образуют такие белковые цепочки, которые ферменты протеазы разрезают на более мелкие части, которые затем помогают вирусу в большей степени использовать себя в клетке ( SN: 3/10/20 ). Нарушение способности протеазы разрезать может остановить репликацию вируса.

В исследовании 2016 года шесть из восьми кошек вылечились от инфекции смертельной формой кошачьего коронавируса после лечения этим препаратом, сообщили Педерсен и его коллеги в PLOS Pathogens . Две умершие кошки были среди четырех, у которых развились серьезные симптомы, такие как желтуха и высокая температура.Но эти кошки, возможно, страдали от осложнений, связанных с применением отдельного лекарства, которое им вводили для облегчения болезни, пишет команда.

В исследовании также сообщается, что в пробирке GC376 может остановить другие коронавирусы, кроме кошачьего. Препарат, например, подавляет протеазы двух других вирусов, которые вызвали серьезные вспышки у людей: коронавируса SARS, от которого люди заболели в 2002 и 2003 годах, и ближневосточного респираторного синдрома, или MERS, коронавируса ( SN: 4/23/03 ; СН: 27.02.13) .

Надежная журналистика имеет свою цену.

Ученые и журналисты разделяют главную веру в то, что нужно задавать вопросы, наблюдать и проверять, чтобы достичь истины. Новости науки сообщает о важнейших исследованиях и открытиях в научных дисциплинах. Чтобы это произошло, нам нужна ваша финансовая поддержка — каждый вклад имеет значение.

Подпишитесь или пожертвуйте сейчас

Исследователи, в том числе Юн Ван, химик, изучающий разработку противовирусных препаратов в Университете Аризоны в Тусоне, обнаружили, что GC376 может остановить работу протеазы SARS-CoV-2 в пробирке.Ван, который сообщил об этих результатах 15 июня в Cell Research , говорит, что его команда сейчас тестирует соединение на мышах. И в результатах, представленных 4 августа на виртуальной встрече Американской кристаллографической ассоциации, биохимик Джоан Лемье и его коллеги показали, что GC376 не только ингибирует фермент SARS-CoV-2 в пробирке, но также может препятствовать репликации вируса в выращенных в лаборатории клетках обезьян. Эти результаты также были опубликованы 5 мая на сайте bioRxiv.org.

Основываясь на этих выводах и на том факте, что препарат безопасен и эффективен для кошек, компания, производящая GC376, Anivive Lifesciences, базируется в Лонг-Бич, Калифорния., в настоящее время работает над продвижением клинических испытаний на людях, — говорит Лемье из Университета Альберты в Эдмонтоне, Канада.

«Тот факт, что это лекарство уже было разработано и доказало свою эффективность в лечении инфекционного перитонита кошек, действительно предвещает хорошее», — говорит Лемье.

Другой кошачий препарат GS-441524, который был эффективен против кошачьего коронавируса, похож на ремдесивир. Соединения имеют схожую химическую структуру, хотя ремдесивир имеет дополнительную часть, которая лучше помогает ему проникать в клетки.

Ремдесивир и GS-441524, препараты, разработанные биофармацевтической компанией Gilead Sciences, базирующейся в Фостер-Сити, Калифорния, имитируют строительный блок генетической молекулы РНК, из которой состоит генетический материал коронавируса. По мере того как вирус реплицируется, он включает строительный блок-подражатель в свою РНК, что предотвращает добавление вирусными ферментами дополнительных строительных блоков, останавливая репликацию ( SN: 7/13/20 ).

Педерсен и его коллеги сообщили, что GS-441524 является эффективным средством лечения инфекционного перитонита кошек в июне 2018 года в Veterinary Microbiology .Препарат не только подавлял репликацию вируса в клетках, выращенных в лаборатории, но и успешно лечил 10 из 10 зараженных коронавирусом кошек, у которых развилось тяжелое заболевание. В отдельном исследовании, опубликованном в феврале 2019 года в журнале Journal of Feline Medicine and Surgery , 25 из 26 кошек, получавших препарат в течение как минимум 12 недель, выжили.

Есть также некоторые свидетельства того, что GS-441524 может помочь людям с COVID-19. Исследование, проведенное 21 июля в Cell Reports , показало, что препарат может ингибировать репликацию SARS-CoV-2 в выращенных в лаборатории клетках обезьян и человека. Ремдесивир, однако, был более активен в клетках легких человека, тогда как GS-441524 был более активен в клетках обезьян.

Смотрите все наши репортажи о вспышке коронавируса

Несмотря на такие многообещающие результаты у кошек, препарат не доступен для использования на этих животных. И, вместо этого сосредоточив внимание на ремдесивире, который представляет собой сложную молекулу, которую труднее сделать, критики говорят, что компания сосредотачивается на потенциально более прибыльном лекарстве и поэтому ставит свою прибыль выше общественного здравоохранения.Компания Gilead не ответила на вопросы Science News о лицензировании GS-441524 . Но компания отметила, что она смогла быстро перейти к ремдесивиру, потому что препарат уже прошел испытания на безопасность человека.

Этот препарат был протестирован на людях с Эболой во время вспышки 2014–2016 годов в Западной Африке и вспышки 2018–2020 годов в Конго. Хотя он не был эффективным против лихорадки Эбола, знание того, что он не причинит вреда пациентам, позволило Gilead обойти этот процесс и начать тестирование против SARS-CoV-2. Сейчас он проходит клинические испытания COVID-19, некоторые из которых показали, что препарат может ускорить выздоровление пациента. 10 августа компания Gilead подала заявку на одобрение FDA для ремдесивира.

GS-441524, с другой стороны, никогда не вводился людям. И хотя ученые могут делать предположения о безопасности на основе исследований на животных, наличие данных о GS-441524 на людях, конечно, по-прежнему важно, предупреждает Э. Сьюзан Амириан, молекулярный эпидемиолог из Университета Райса в Хьюстоне.

Компания Gilead начала доклинические исследования для сравнения обоих препаратов, сообщил представитель компании Крис Ридли.

Хотя еще неизвестно, сработают ли GS-441524 или GC376 против SARS-CoV-2 у людей, эти препараты являются примером того, как понимание связи между здоровьем животных и человека может помочь в борьбе с новыми вирусами. «Отчасти из-за исследований кошачьего инфекционного перитонита, многие ветеринары, похоже, осознали на раннем этапе пандемии COVID-19, что ремдесивир может быть многообещающим кандидатом», — говорит Амириан. «Параллели между медициной человека и ветеринарной медициной впечатляют.”

Противовирусный препарат, используемый для лечения коронавирусной инфекции у кошек, может быть эффективным против SARS-CoV-2, говорится в исследовании Health News, Firstpost

.

Группа исследователей из Университета Альберты, Канада, утверждает, что пролекарство GC376, которое используется для лечения потенциально смертельной болезни кошачьего коронавируса, эффективно против вируса SARS-CoV-2, вызывающего COVID-19.

Пролекарства — это соединения, которые должны метаболизироваться в организме, прежде чем они станут активными. GC376 преобразуется в GC373.

Исследование, опубликованное в рецензируемом журнале Nature Communications , предполагает, что лекарство нацелено на фермент под названием Mpro в вирусе, вызывающем COVID-19, и является сильным кандидатом в лекарство для лечения коронавирусной болезни, поскольку уже доказано, что он действует быть эффективным у животных.

Исследовательская группа собирается начать клинические испытания препарата в первой фазе.

Коронавирус кошек (FCoV)

Коронавирус кошек FCoV — распространенная инфекция, поражающая от 25 до 40 процентов домашних кошек в мире.Вирус попадает в организм кошки оральным путем (например, при лизании) и размножается в кишечнике. Кошка выделяет вирус с фекалиями, где вирус может сохраняться до нескольких недель. Дезинфицирующие средства легко уничтожают кошачий коронавирус.

У большинства кошек эта инфекция протекает бессимптомно. Однако у них может развиться легкая форма диареи или это может привести к опасному для жизни состоянию, называемому кошачьим инфекционным перитонитом (FIP). Последний развивается только тогда, когда вирус FCoV развивает мутантный штамм внутри кишечного тракта кошки, который может инфицировать макрофаги (тип клеток иммунной системы) и распространяться по всему телу.

FCoV — это альфа-коронавирус, а SARS-CoV-2 — бета-коронавирус. Первый не вызывает инфекции у людей, хотя в некоторых случаях ученые находили нейтрализующие антитела против SARS-CoV-2 у кошек.

Ингибиторы протеаз и новейшие препараты

Протеазы — это ферменты, которые имеют решающее значение для функционирования клеток. Ингибиторы протеаз — один из наиболее распространенных классов лекарств, которые рассматриваются для лечения заболеваний, когда они проявляют низкую токсичность.Протеазы, такие как Типранавир, использовались для лечения ВИЧ. Другие препараты против ВИЧ, такие как лопинавир и ритонавир, также являются протеазами.

Mpro — это протеаза, присутствующая в вирусе SARS-CoV-2, которая помогает вирусу реплицироваться и создавать копии самого себя. Ранее предполагалось, что эта протеаза устойчива к мутациям, и поэтому многие эксперты искали ингибиторы, которые могут остановить функционирование протеазы Mpro.

Различные другие ингибиторы Mpro, включая эбселен, исследуемый препарат для лечения потери слуха, и дисульфирам, препарат, используемый для лечения алкоголизма, ранее показали свою эффективность против вируса, вызывающего COVID-19.

Ранее предполагалось, что

GC376 обладает широкой специфичностью против Mpro нового коронавируса. Чтобы изучить действие этого препарата против вируса SARS-CoV-2, исследователи подвергли вирус действию препарата в культурах клеток.

Было обнаружено, что GC376 при инкубации с SARS-CoV-2 превращается в GC373, который связывается с активным сайтом протеазы Mpro, ингибируя функцию протеазы. Активный центр фермента — это карман в ферменте, в котором субстрат (соединение, на которое действует фермент) связывается с ним.

«Мы определили трехмерную форму протеазы с лекарством в кармане активного центра, показав механизм ингибирования. Это позволит нам разработать еще более эффективные лекарства », — сказала Джоан Лемье, автор-корреспондент исследования и профессор биохимии Университета Альберты, Канада, в пресс-релизе университета.

Она также добавила, что команда продолжит поиск модифицированных версий этого препарата, которые бы еще лучше подходили для активного сайта Mpro и, таким образом, были бы более эффективными.

Подробнее о типах коронавируса читайте в нашей статье о коронавирусной инфекции.

Статьи о здоровье в Firstpost написаны myUpchar.com, первым и крупнейшим в Индии ресурсом проверенной медицинской информации. В myUpchar исследователи и журналисты работают с врачами, чтобы предоставить вам информацию обо всем, что касается здоровья.

Лекарство от коронавируса кошек подавляет основную протеазу SARS-CoV-2 и блокирует репликацию вируса

Синтез GC373, GC376 и субстрата FRET-пептида

Протоколы, детали синтеза, характеристика соединений и соответствующая методологическая информация приведены в дополнительных методах .Идентичность и чистоту (> 95%) всех соединений определяли с помощью хроматографии (силикагель или RP-18 HPLC), полностью назначили спектры ЯМР ¹ H и ¹³ C-ЯМР и масс-спектры высокого разрешения.

Клонирование, экспрессия и очистка SARS-CoV M

^pro и SARS-CoV-2 M ^pro

ДНК, кодирующая основную протеазу M ^pro из SARS-CoV-2 (Genbank: MN908947. 3) был получен от BioBasic Inc. (Онтарио, Канада) и содержит сайт рестрикции Eco RI выше и сайт рестрикции Hin dIII ниже слитого гена.Кодон гена M ^pro был оптимизирован для экспрессии в Escherichia coli . Ген слияния был клонирован в сайты рестрикции Eco RI и Hin dIII вектора экспрессии pET SUMO (малый убиквитин-подобный модификатор) (Invitrogen), таким образом гарантируя, что белок SARS-CoV-2 M ^pro находится в рамка с His-меченным белком SUMO. Полученной плазмидой трансформировали E. coli BL21 (DE3), индуцировали 0,5 мМ изопропил-β-d-1-тиогалактопиранозидом, и белок экспрессировали в течение 4–5 ч при 37 ° C.Клетки собирали центрифугированием (4400 × г в течение 10 мин при 4 ° C) и суспендировали в буфере для лизиса (20 мМ трис-HCl pH 7,8, 150 мМ NaCl, 5 мМ имидазол). Клетки лизировали обработкой ультразвуком, обломки клеток удаляли центрифугированием (27000 × г в течение 10 мин при 4 ° C), и супернатант наносили на колонку со смолой Ni-NTA (Qiagen). После промывания смолы 10 объемами колонки буфера для лизиса, содержащего 20 мМ имидазол, слитый белок элюировали 40–500 мМ имидазолом в буфере для лизиса.Элюированные фракции анализировали электрофорезом в додецилсульфат-полиакриламидном геле (SDS-PAGE), образцы с представляющим интерес белком объединяли вместе, диализовали против буфера для лизиса, содержащего 1 мМ DTT, при 4 ° C и концентрировали с использованием фильтра Amicon Ultra-15 (Millipore ) с MWCO 10 кДа. Слитый белок расщепляли His-меченной протеазой SUMO (McLab, Южный Сан-Франциско, Калифорния) при 4 ° C в течение 1-2 часов для удаления метки SUMO. Затем смесь для расщепления пропускали через колонку со смолой Ni-NTA.Проходящий поток, содержащий SARS-CoV-2 M ^pro , собирали и анализировали с помощью SDS-PAGE. Белок SARS-CoV-2 M ^pro дополнительно очищали с использованием эксклюзионной хроматографической колонки (G-100, GE Healthcare), уравновешенной 20 мМ Трис, 20 мМ NaCl, 1 мМ DTT, pH 7,8. Фракции, содержащие белок SARS-CoV-2 M ^pro , объединяли и концентрировали с использованием фильтра Amicon Ultra-15 с MWCO 10 кДа. Кроме того, образец слитого белка SUMO-SARS-CoV-2 M ^pro также очищали с использованием эксклюзионной хроматографии и концентрировали, как описано выше.Плазмида, кодирующая SARS-CoV M ^pro с N-концевой His-меткой перед сайтом расщепления FactorX, была любезным подарком доктора Майкла Джеймса. Белок был очищен в соответствии с предыдущим протоколом ⁹ .

Масс-спектрометрия SARS-CoV-2 M

^pro

Масса свободного SARS-CoV-2 M ^pro была подтверждена HR-MALDI на MALDI-TOF (Bruker Ultrafelxtreme, Bruker Daltronics, США) и ЖХ-МС на приборе ESI-TOF (Agilent Technologies 6220, Калифорния, США) с использованием ионизации электрораспылением и анализа с помощью пакета программного обеспечения Agilent Mass Hunter Qualitative Analysis (версия B.03.01 SP3).

Кинетика ферментов SARS-CoV-2 и SARS-CoV M

^pro

Синтезированный флуоресцентный субстрат, содержащий сайт расщепления (обозначен стрелкой, ↓) SARS-CoV-2 M ^pro (Abz-SVTLQ ↓ SG-Tyr (NO ₂ ) -R) использовали для анализа расщепления на основе флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET) ¹⁵ . Протеазные реакции SARS-CoV-2 M ^pro и SARS-CoV M ^pro в отношении флуоресцентного субстрата проводили в буфере активности (20 мМ Bis-Tris, pH 7.8, 1 мМ DTT) при 37 ° C в течение 10 мин. Конечная концентрация протеаз, используемых в анализе, была зафиксирована на уровне 80 нМ, а концентрации субстрата варьировали от 0,1 до 500 мкМ. Реакцию начинали с фермента, и сигнал флуоресценции продукта расщепления пептида Abz-SVTLQ контролировали при длине волны излучения 420 нм с возбуждением на длине волны 320 нм с использованием флуоресцентного спектрофотометра Flx800 (BioTek). Перед кинетическими расчетами было проверено, что пропорциональность между испускаемой флуоресценцией и количеством субстрата, используемого в анализе, была линейной.Была выбрана минимальная концентрация фермента и время реакции, которые давали линейную зависимость количества образующегося продукта от времени. Начальные скорости в соответствующих относительных единицах флуоресценции в единицу времени (ΔRFU / с) были преобразованы в количество расщепленного субстрата в единицу времени (мкМ / с) путем подгонки к калибровочной кривой для свободного Abz-SVTLQ. Все данные были скорректированы с учетом эффектов внутреннего фильтра в соответствии с принятым протоколом литературы ¹⁷ . Короче говоря, определяли сигнал флуоресценции (RFU) при каждой концентрации субстрата и определяли его как f (FRET).Затем 5 мкл свободного аминобензоил-SVTLQ в конечной концентрации 5 мкМ добавляли к каждой концентрации субстрата и измеряли флуоресценцию: f (FRET + аминобензоил-SVTLQ). Одновременно были взяты эталонные показания с той же концентрацией свободного аминобензоил-SVTLQ, которые были определены как f (ref). Коррекция внутреннего фильтра была получена как: corr% = (f (FRET + аминобензоил-SVTLQ) — f (FRET)) / f (ref) × 100%. Скорректированная начальная скорость реакции была рассчитана как v = v _o / (corr%). v _o представляет начальную скорость каждой реакции.

Кинетические параметры ( V _max и K _m ) были получены путем аппроксимации графика скорректированных начальных скоростей в зависимости от концентрации субстрата по уравнению Михаэлиса – Ментен, v = v _max × [ S ] / ( K _m + [ S ]) с помощью программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad 8. 3.1 ). k _cat / K _m был рассчитан по формуле, k _cat / K _m = v _max / ([ E ] К _м ). Для каждой точки данных проводили трехкратные эксперименты, и значение представляли как среднее ± стандартное отклонение (SD).

Параметры ингибирования

Исходные растворы GC373 и GC376 готовили с 10% водным диметилсульфоксидом (ДМСО).Для определения IC ₅₀ 80 нМ SARS-CoV-2 M ^pro инкубировали с GC373 или GC376 при различных концентрациях от 0 до 100 мкМ в 20 мМ бис-трис, pH 7,8, 1 мМ DTT при 37 ° C в течение 10 мин. Протеазную реакцию начинали добавлением 100 мкМ субстрата. Программное обеспечение GraphPad Prism (GraphPad 8.3.1) использовалось для расчета значений IC ₅₀ . Оба ингибитора тестировали на неспецифическое связывание, выполняя эталонное титрование в отсутствие DTT, показывающего отсутствие влияния на полученные показания флуоресценции (данные не показаны).

Кристаллизация

Для кристаллизации очищенный SARS-CoV-2 M ^pro диализовали против буфера, содержащего 10 мМ NaCl и 5 мМ Tris-HCl pH 8,0, в течение ночи при 4 ° C и концентрировали с помощью центробежного фильтра Millipore (10 кДа Порог MW) до 9 мг / мл. Белок инкубировали с пяти молярным избытком ингибитора при 4 ° C в течение 2 ч перед кристаллизацией. Для SARS-CoV-2 M ^pro белок подвергали скринингу кристаллизации PACT (молекулярные размеры), при этом для обоих ингибиторов были выявлены совпадения в нескольких условиях.Для Apo-SARS-CoV-2 M ^pro лучшие кристаллы наблюдались с висячими поддонами для капель при комнатной температуре в соотношении 1: 1 с маточным раствором 0,2 M сульфата натрия, 0,1 M бис-трис-пропаном pH 6,5 и 20 % мас. / об. ПЭГ 3350. SARS-CoV-2 M ^pro с ингибиторами, кристаллизовавшимися с маточной жидкостью, содержащей 0,2 М хлорид натрия 0,1 М 4- (2-гидроксиэтил) -1-пиперазинэтансульфоновая кислота (HEPES) pH 7,0 и 20 % мас. / об. PEG 6000. Перед замораживанием кристаллы инкубировали с 15% глицерином в качестве криопротектора.Первоначально кристаллы подвергались скринингу на нашем домашнем источнике 007 MicroMax (Rigaku Inc.) с скринингом кристаллов и окончательным сбором данных в Стэнфордском источнике синхротронного излучения (SSRL), канал 12–2 с Blu-Ice с использованием интерфейса Web-Ice ³⁰ .

Сбор дифракционных данных, определение фазы, построение и уточнение модели

Все наборы дифракционных данных были собраны с использованием синхротронного излучения с длиной волны 0,97946 Å на канале 12–2 SSRL в Калифорнии, США, с использованием детектора Dectris PILATUS 6 M.Несколько наборов данных было собрано из кристаллов свободного фермента SARS-CoV-2 M ^pro , а также обработанных GC376 и GC373. Для обработки наборов данных использовались XDS2 ³¹ и Scala. Набор данных дифракции свободного SARS-CoV-2 M ^pro был обработан с разрешением 1,75 Å в пространственной группе P21 (дополнительная таблица 1). Для комплекса SARS-CoV-2 M ^pro с GC376 и GC373 собранный набор данных был обработан с разрешением 1,9 Å и 2.0 Å и в пространственной группе C2 (дополнительная таблица 1). Все три структуры были определены путем молекулярного замещения кристаллической структурой свободного фермента SARS-CoV-2 M ^pro (запись PDB 6Y7M) в качестве модели поиска с использованием программы Phaser от Phenix ³² , версия v1. 18.1-3855). Ligand Fit от Phenix использовался для подбора плотности обоих ингибиторов на предварительно рассчитанной карте из уточнения Phenix с использованием кода лиганда K36. Уточнение трех структур было выполнено с помощью phenix.доработать в программном обеспечении Phenix. Статистика дифракции, обработки данных и уточнения модели приведена в (Дополнительная таблица 1). Модель была проверена с помощью графиков Рамачандрана и окончательных моделей, отображаемых с помощью программного обеспечения молекулярной графики PyMOL (версия 1.7.6.5 Schrödinger, LLC).

Определение EC

₅₀ с помощью анализа уменьшения образования зубного налета

SARS-CoV-2 / CANADA / VIDO 01/2020 был любезным подарком от Даррила Фалзарано (Университет Саскачевана). Клетки Е6 Vero (почки самки зеленой мартышки) инфицировали с MOI 0.0001 БОЕ / клетка в инфекционной среде, состоящей из среды Игла, модифицированной Дульбекко, с добавлением 1 × незаменимых аминокислот (Gibco), 10 мМ HEPES, 2% фетальной бычьей сыворотки, 50 МЕ / мл пенициллина, 50 МЕ / мл стрептомицина, различные дозы GC373 или GC376. Через 1 ч инфицирующую среду удаляли и монослои покрывали ростовой средой (MEM с добавлением 10 мМ HEPES), содержащей 1,2% Avicel RC-591 (DuPont), содержащую соответствующую дозу GC373 или GC376. Через 48 ч клетки фиксировали в 10% формальдегиде и окрашивали 0.5% (мас. / Об.) Кристаллического фиолетового. Подсчитывали бляшки и данные наносили на график в виде% ингибирования против log ₁₀ [лекарственное средство] с использованием Prism (GraphPad). Значения ЕС ₅₀ определяли с использованием нелинейного регрессионного анализа. Эксперименты проводили в трех экземплярах. Планки погрешностей указывают стандартное отклонение. Чтобы изучить снижение секреции вирусной РНК клетками Vero E6, вызванное GC373 и GC376, клетки инфицировали SARS-CoV-2 MOI = 0,01 БОЕ / клетку в присутствии различных концентраций GC373 или GC376 в течение 1 часа, среду удаляли и заменяли ростовой средой, также содержащей GC373 и GC376, и супернатанты собирали через 48 часов и количественно определяли с помощью количественной ОТ-ПЦР.

Количественное определение вирусной РНК SARS-CoV-2 в супернатантах клеточных культур с помощью qRT-PCR

Супернатанты клеток (140 мкл) собирали в различные моменты после заражения, и РНК выделяли с помощью мини-набора QIAmp Viral RNA Mini в соответствии с инструкциями производителя (Qiagen). Обратную транскрипцию проводили на 2 мкл с использованием мастер-микса Superscript IV Vilo (Invitrogen). Количественную ПЦР проводили с использованием 2 мкл кДНК в смеси TaqMan Fast Master с использованием праймеров и зонда для гена N (праймеры N2), разработанных центром США по контролю и профилактике заболеваний (IDT, кат. № 10006606).Стандартная кривая была построена с использованием разведений стандартов положительного контроля от CDC (IDT cat # 10006625).

Измерение цитотоксичности в клетках A549 и Vero E6

Жизнеспособность клеток измеряли с помощью люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo (Promega). Клетки A549 (мужской эпителиальный эпителий легкого человека) или клетки Vero E6 высевали в 96-луночных планшетах из расчета 5 × 10 ³ клеток / лунку и инкубировали в течение ночи перед обработкой. Соединения GC373 и GC376 солюбилизировали в ДМСО и добавляли к клеткам в восьмиточечном четырехкратном серийном разведении (от 200 мкМ до 0.0122 мкМ). Клетки инкубировали в присутствии соединений в течение 24 часов перед добавлением субстрата люминесценции и измерением активности АТФ в соответствии с инструкциями производителя. Процент жизнеспособных клеток рассчитывали относительно клеток, обработанных одним растворителем (0,5% ДМСО). Результаты наносили на график как среднее значение трех независимых экспериментов ± стандартное отклонение, где каждый эксперимент состоял из четырех повторностей лунок на концентрацию соединения.

Краткое изложение отчета

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Резюме отчета об исследовании природы, связанном с этой статьей.

Методы диагностики коронавируса кошек: обзор

Коронавирусы кошек (FCoV) встречаются во всем мире. Инфекция FCoV может приводить к появлению разнообразных признаков от клинически неявных инфекций до смертельного заболевания, называемого инфекционным перитонитом кошек (FIP). FIP — одно из самых серьезных вирусных заболеваний кошек. Несмотря на то, что не существует ни эффективной вакцины, ни лечебного средства от FIP, протокол диагностики FCoV значительно поможет в управлении и контроле над вирусом.Клинические данные при FIP неспецифичны и не помогают при дифференциальной диагностике. Гематологические и биохимические отклонения в случаях FIP также неспецифичны. Доступные в настоящее время серологические тесты имеют низкую специфичность и чувствительность для выявления активной инфекции и перекрестной реакции со штаммами FCoV низкой патогенности, кишечными коронавирусами кошек (FECV). Полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) была использована для обнаружения FCoV, она быстрая и чувствительная, но результаты необходимо интерпретировать в контексте клинических данных.В настоящее время окончательный диагноз FIP может быть установлен только при гистопатологическом исследовании биоптатов. В этой статье описываются и сравниваются методы диагностики FCoV, а также дается краткое изложение биологии, эпидемиологии и патогенеза вируса.

1. Введение

Коронавирусы кошек (FCoV) представляют собой оболочечные вирусы с большим, закрытым геномом полиаденилированной РНК, состоящим примерно из 29 190 нуклеотидов. FCoV представляют собой коронавирусы группы 1, недавно обозначенные как члены подгруппы 1a в семействе Coronaviridae .Другие члены этой подгруппы включают вирус трансмиссивного гастроэнтерита (TGEV), коронавирус собак (CCV), коронавирус енотовидных собак (RDCoV) и коронавирус китайского хорька-барсука (CFBCoV) [1].

Порядок генов, кодирующих вирусную полимеразу (Pol) и четыре структурных белка (белки шипа, оболочки, мембраны и нуклеокапсида): 5′-Pol-S-E-M-N-3 ‘. Эти гены присутствуют во всех коронавирусах. Геном коронавируса кошек также включает дополнительные гены (3a, 3b, 3c, 7a и 7b), которые кодируют неструктурные белки.Функции этих генных продуктов до конца не изучены [2].

Известны два биологических типа FCoV: вирус инфекционного перитонита кошек (FIPV) и кишечный коронавирус кошек (FECV). Согласно широко принятой теории «мутации in vivo », FIPV возникает в результате мутации родительского FECV в желудочно-кишечном тракте инфицированной кошки, распространяется системно и вызывает FIP [3–5]. Сайты мутаций до конца не изучены, но некоторые вспомогательные гены (3c и 7b) являются кандидатами на место критических мутаций, ответственных за FIP [6, 7].Альтернативной гипотезой является теория «циркулирующего вирулентного / авирулентного», которая предполагает, что как вирулентные, так и авирулентные штаммы циркулируют в популяциях кошек, и что у восприимчивых людей, подвергшихся воздействию вирулентных штаммов, развивается болезнь. Эта гипотеза была предложена после анализа последовательности четырех генов (Pol, S, M и 7b) от инфицированных FCoV здоровых кошек и кошек с FIP. Филогенетический анализ показал, что последовательности генов M и 7b в вирусах, полученных от здоровых кошек, отличаются от таковых, полученных от больных кошек, и предполагают сосуществование обоих биотипов у кошек [8].Однако, поскольку эти вирусы легко подвергаются мутации [7], а генетические различия в гене 7b не коррелировали с патогенностью в другом исследовании [9], эпидемиология FIPV еще не прояснена.

Независимо от источника FIPV и неопределенности относительно значимости генетических различий, взаимосвязь между вирулентностью и тропизмом макрофагов / моноцитов была твердо установлена ​​[7]. Хотя и FIPV, и FECV могут вызывать виремию [10–12], только FIPV реплицируется в макрофагах и вызывает заболевание [5, 13].Сложные иммунные реакции между вирусом, противовирусными антителами и комплементом вызывают диссеминированный васкулит, который является отличительной чертой FIP [14, 15].

На основании их антигенной связи с собачьим коронавирусом, анализа последовательности гена S и характеристик роста in vitro штаммы FCoV можно разделить на серотипы I и II. Штаммы FCoV серотипа I относятся исключительно к кошачьим. Их трудно выращивать в культуре клеток и они вызывают медленно развивающийся цитопатический эффект.Штаммы FCoV серотипа II, по-видимому, возникли в результате рекомбинации между FCoV серотипа I и CCV. Они растут быстрее, чем вирусы серотипа I, и вызывают литический цитопатический эффект. Штаммы FIPV и FECV могут быть серотипом I или II [6, 16–18].

Инфекция FCoV чрезвычайно распространена в популяциях кошек. Антитела против FCoV обнаруживаются у 20–60% домашних кошек и до 100% кошек в питомниках или домах с несколькими кошками [14, 19–24]. FCoV очень заразны и распространяются преимущественно фекально-оральным путем.Около 75–100% кошек в среде с несколькими кошками выделяют вирус [14, 25, 26].

2. Диагностика FCoV

Инфекции FECV обычно связаны в лучшем случае с легкой формой заболевания. Многие случаи остаются бессимптомными, и у маленьких котят обычно единственным признаком является легкая преходящая диарея продолжительностью несколько дней. Рвота возникает в меньшем количестве случаев и обычно не является заметным признаком. Инфекция FECV редко вызывает заболевание достаточной степени тяжести, чтобы потребовать специфической диагностики основного этиологического агента.Вирус может быть обнаружен в фекалиях инфицированных котят с помощью электронно-микроскопического исследования или анализа полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР). Однако многие здоровые кошки и котята также выделяют FCoV с фекалиями. Таким образом, кроме выявления носителей или демонстрации наличия FCoV-инфекции в колонии кошек, такие исследования имеют ограниченную ценность [15, 27].

Варианты FIPV FCoV вызывают смертельный перитонит. У кошек со слабым клеточно-опосредованным иммунным ответом развивается эффузивная или «влажная» форма заболевания, которая представляет собой иммунный комплексный васкулит, который вызывает утечку богатой белком жидкости из кровеносных сосудов в брюшную полость, что приводит к вздутию живота. У кошек с частичным клеточным иммунитетом развивается неэфузивная или «сухая» форма с пиогранулематозными или гранулематозными поражениями во многих тканях. Сухой FIP может стать эффузивным на терминальных стадиях заболевания, когда иммунная система разрушается [28, 29].

Антагонистическая диагностика FIP сложна и утомительна. Трудности в окончательной диагностике FIP возникают из-за отсутствия конкретных клинических признаков, отсутствия патогномоничных биохимических отклонений и низкой чувствительности и специфичности тестов, обычно используемых на практике.Диагностика FIP основана на анализе анамнеза, гематологии и других вспомогательных диагностических тестов, включая серологию и результаты визуализации, биопсии тканей и ПЦР [8, 15]. Типичный анамнез случаев FIP включает приобретение кошки из питомника и повышение и понижение температуры, не улучшающуюся при антимикробной терапии. Чаще всего заражаются котята в возрасте от 6 до 8 недель, когда ослабевают материнские антитела, в основном при контакте с фекалиями их матерей или других кошек, выделяющих FCoV [27].

ФИП — заболевание с чрезвычайно разнообразными клиническими проявлениями. При «влажной» форме наиболее характерным признаком является значительное количество внутриполостного выпота (рис. 1). Типичными поражениями при эффузивном FIP являются пиогранулема и фибринозные бляшки на серозных поверхностях органов брюшной полости (рис. 2 и 3). Часто встречаются одышка, умеренная гипертермия и приглушенные тоны сердца . Поражение глаз при FIP может включать увеит, кератические преципитаты и изменения окраски радужной оболочки.В неэфузивной форме поражения обычно возникают в глазах и ЦНС, но гранулемы также могут быть обнаружены в брюшной полости, что приводит к более разнообразным и часто более расплывчатым клиническим признакам [15, 29] (Рисунок 4).

Рентгенограммы могут выявить плевральный, перикардиальный или перитонеальный выпот, а также гепатомегалию или реномегалию. У некоторых кошек брыжеечная лимфаденопатия может приводить к опухолевым образованиям в брюшной полости. Ультрасонография может использоваться для подтверждения наличия абдоминальной жидкости у кошек с минимальным объемом жидкости, а также для оценки поджелудочной железы, печени, лимфатических узлов и почек.Магнитно-резонансная томография (МРТ) может выявить усиление перивентрикулярного контраста, расширение желудочков и гидроцефалию у кошек с неврологическим FIP [30, 31].

3. Общие диагностические тесты

Существует ряд лабораторных исследований, которые часто встречаются у кошек с FIP, но ни одно из них не является патогномоничным. Хотя часто утверждается, что лимфопения и нейтрофилия типичны для FIP, это изменение можно интерпретировать как типичную «стресс-лейкограмму», которая встречается у кошек при многих тяжелых системных заболеваниях [32, 33].

Наиболее постоянным лабораторным обнаружением FIP является увеличение общей концентрации белка в сыворотке. Это обнаруживается примерно у 50% кошек с эффузивной болезнью и у 70% кошек без эффузивной болезни. Увеличение общего белка вызвано повышенной концентрацией глобулинов, в основном-глобулинов. Концентрация-глобулина более 32% характерна для FIP [33–36]. Изменения профиля сывороточного протеина приводят к снижению соотношения альбумин / глобулин (A: G). Соотношение A: G меньше 0.5 сильно коррелирует с FIP [37].

Белки острой фазы (АРР) представляют собой большую и разнообразную группу гликопротеинов в сыворотке крови, концентрации которых увеличиваются (или уменьшаются) при определенных воспалительных заболеваниях. Концентрации АРР, таких как кошачий α 1-кислотный гликопротеин (fAGP) и сывороточный амилоид A (SAA), могут быть измерены и облегчить диагностику. Концентрации SAA и fAGP увеличиваются при FIP, но они не специфичны для этого заболевания. В то время как умеренно повышенные уровни белков острой фазы обнаруживаются при нескольких воспалительных состояниях, высокие уровни fAGP (> 1.5 г / л) и SAA в плазме или излияниях могут указывать на FIP и могут быть полезными вспомогательными тестами [38–41].

Взятие образцов из выпотов является важным диагностическим шагом для FIP, потому что тесты на выпоты имеют гораздо более высокую диагностическую ценность, чем тесты, проводимые на образцах крови. Вытоки обычно прозрачно-желтого цвета и вязкие и могут образовывать нити фибрина. Однако наличие этого типа жидкости в полостях тела само по себе не является диагностическим. Вовлечение перитонеальной и множественной полостей было зарегистрировано в 58% и 11% случаев FIP соответственно [7, 15].

Выпот, наблюдаемый при FIP, классифицируется как модифицированный экссудат транссудата с очень высоким содержанием белка (> 3,5 г / дл) и умеренным содержанием клеток. Выпот FIP можно исследовать с помощью простого и дешевого метода, называемого тестом Ривальта. Добавление небольшой капли выпота в пробирку с дистиллированной водой и капли 8% уксусной кислоты может вызвать выпадение осадка из-за высокого содержания белка. Этот тест, по-видимому, полезен для дифференциации излияний, вызванных FIP, и излияниями, вызванными другими заболеваниями.Однако ложноотрицательные результаты могут быть получены у кошек с бактериальным перитонитом, а ложноположительные — у кошек с лимфомой [37, 38].

Цитологическая оценка выпота у кошек с FIP выявляет макрофаги и нейтрофилы на плотном белковом фоне. Нейтрофилы не являются дегенеративными или могут иметь умеренные ядерные дегенеративные изменения. Лимфоциты и плазматические клетки также могут быть обнаружены в жидкости.

В исследовании Hartmann et al. [37] иммунофлуоресцентное окрашивание внутриклеточного антигена FCoV в макрофагах в выпоте имело положительную прогностическую ценность 100%, но отрицательную прогностическую ценность не было высоким (57%).Это может быть связано с небольшим количеством макрофагов в мазке или маскировкой антигена за счет конкурентного связывания антител против FCoV в выпоте [15].

Другие лабораторные параметры (например, ферменты печени, билирубин, мочевина и креатинин) могут варьироваться в зависимости от степени и локализации поражения органа, но они не помогают при постановке этиологического диагноза [15, 27, 38] .

4. Серология

Измерение антител в сыворотке является полезным диагностическим инструментом для выявления инфекции FCoV.Однако, поскольку у большого процента здоровых кошек есть антитела против FCoV, тестирование на антитела более полезно для лечения инфекции FCoV (например, создание питомника без FCoV) [15]. Чувствительность и специфичность коммерчески доступного практического тестового набора для обнаружения антител к FCoV (ImmunoComb FCoV Antibody Test Kit, Biogal, Израиль) составляли 95% и 83% соответственно [42].

Тестирование на антитела у кошек с подозрением на FIP имеет ограниченную ценность для подтверждения диагноза, и результаты следует интерпретировать осторожно.Некоторые кошки с влажной формой FIP имеют низкие титры или даже не имеют антител против FCoV. Это связано с тем, что большое количество вируса в организме кошки связывается с антителами и делает их недоступными для антигена в тесте, или потому, что антитела теряются с выделениями [15]. Использование белков анти-7b для серологического исследования, по-видимому, не дает каких-либо значительных преимуществ [43].

Поскольку FIP является иммуноопосредованным заболеванием, комплексы антитело-антиген могут циркулировать в сыворотке и излияниях. Циркулирующие комплексы могут быть обнаружены с помощью конкурентного иммуноферментного анализа (ELISA). Однако полезность этого анализа ограничена, поскольку прогностическая ценность положительного результата теста невысока (67%) и есть много ложноположительных результатов [37, 44].

5. Анализы полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР)

Имеется несколько сообщений об обнаружении FCoV с помощью ОТ-ПЦР. Некоторые использовали праймеры, нацеленные на консервативные области вирусного генома, такие как Pol [45–47], ген 7b [43, 48, 49] и 3 ‘нетранслируемую область (3’ UTR) [50–52]. Анализы RT-PCR с использованием этих праймеров способны обнаружить большинство, если не все, штаммы FCoV и могут быть ценным инструментом для скрининга вируса в популяциях кошек.Чувствительность и специфичность анализа ОТ-ПЦР можно повысить с помощью методов ОТ-ПЦР в реальном времени [53]. Поскольку последовательность гена S различается между серотипами I и II, некоторые анализы ОТ-ПЦР нацелены на ген S для дифференциации серотипов FCoV [18, 54].

Поскольку конкретные генетические детерминанты биотипов FCoV неизвестны, а геном содержит различные однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) [7, 55, 56], невозможно разработать праймеры для ПЦР, чтобы различать FIPV и FECV [11] и, таким образом, различать между случаями FIP и FCoV-положительными здоровыми кошками. В 2005 году Саймонс и его коллеги [57] представили новый подход, основанный на ПЦР, для обнаружения FIP. Подход был основан на ключевом патогенном событии FIP, репликации вируса в макрофагах и моноцитах. Праймеры нацелены на консервативную область гена М и лидерную последовательность для обнаружения реплицирующегося вируса в крови. Анализ имел высокую чувствительность и специфичность [57] и в настоящее время используется в некоторых диагностических лабораториях [28, 58]. Однако в исследовании 26 кошек Can-ahna et al. (2007) обнаружили низкую специфичность анализа с использованием тех же праймеров [59].Причина высокого уровня ложноположительных результатов у здоровых кошек (53%) в этом втором исследовании не ясна, но различные наборы для выделения РНК, использованные в этих исследованиях, могли повлиять на качество матричной РНК и результат ОТ-ПЦР. [47]. Более того, поскольку в обоих исследованиях использовались обычные методы ОТ-ПЦР, они не смогли количественно определить реплицирующуюся мРНК в крови инфицированных кошек. Следовательно, количественный анализ ОТ-ПЦР в реальном времени, который может определить количество вирусной мРНК в крови, может помочь лучше дифференцировать FCoV-положительных здоровых кошек от случаев FIP.

Анализы ОТ-ПЦР использовались для обнаружения FCoV в образцах фекалий, они чувствительны и полезны для документирования того, что кошка выделяет FCoV с фекалиями. С образцами фекалий следует обращаться осторожно, хранить их в замороженном состоянии и защищать от ферментов, разрушающих РНК, которые присутствуют в большинстве сред. ОТ-ПЦР следует проводить как можно скорее после отбора проб, и даже замораживание образцов может привести к ложноотрицательным результатам. Сила сигнала ОТ-ПЦР в фекалиях коррелирует с количеством вируса, присутствующего в кишечнике [15].Сравнение образцов РНК, экстрагированных из фекальных суспензий, и супернатантов клеточных культур, инфицированных FCoV, показало, что присутствие фекальных факторов значительно ингибировало реакцию обратной транскрипции [47]. Однако Педерсен и др. . [26], не обнаружили доказательств наличия фекальных ингибиторов в своем анализе ОТ-ПЦР.

Вирус обнаруживается в различных тканях и асцитической жидкости [50, 56, 60, 61]. Образцы печени (48%) и селезенки (42,3%) с большей вероятностью содержат определяемый FCoV, чем почки (21.1%). Кроме того, количество РНК, экстрагированной из свежих тканей, было значительно выше, чем из ткани, фиксированной в формалине, этаноле или растворе Буэна [61].

Праймеры, разработанные для выявления FIP у больных кошек, также могут усиливать FCoV у здоровых кошек [12, 37, 50]. Таким образом, результаты ОТ-ПЦР следует интерпретировать в сочетании с клиническим состоянием кошки и не могут использоваться в качестве единственного теста для диагностики FIP. Есть несколько правдоподобных объяснений ложноотрицательных результатов ОТ-ПЦР, включая деградацию РНК, отказ реакции обратной транскрипции и вариацию нуклеотидных последовательностей FCoV.Инфекция CCV или TGEV также может способствовать ложноположительным результатам, поскольку они имеют сходные консервативные области [8, 54].

6. Гистопатология и иммуногистохимия

Гистопатологическое подтверждение FIP использовалось для определения случаев и считалось «золотым стандартом» для сравнений диагностических тестов. Срезы, окрашенные гематоксилином и эозином (H & E), обычно имеют локализованное воспаление с макрофагами, нейтрофилами, лимфоцитами и плазматическими клетками (рис. 5).Сосудистые поражения могут быть обнаружены в окружении пролиферации воспалительных клеток, что характерно для влажного FIP. Пиогранулемы в основном связаны с фибринозным некрозом и могут быть большими и консолидированными или многочисленными и маленькими. Очаговые скопления воспалительных клеток и некротически-пролиферативные поражения типичны для гранулематозных поражений при сухом FIP [18, 27, 58, 62] (Рисунок 6).

Иммуногистохимические тесты, такие как окрашивание иммунопероксидазой, могут позволить обнаружить антиген FCoV в ткани.Иммуноокрашивание не позволяет дифференцировать FECV и FIPV, но по мере того, как FIPV реплицируется более активно, в случаях FIP обнаруживаются более высокие концентрации вирусного антигена [15]. Концентрации вирусного антигена ниже в очагах поражения у кошек с сухим FIP, чем у кошек с влажным FIP [14].

7. Заключение

Патогномоничные клинические признаки или специфические лабораторные тесты на FIP у кошек отсутствуют. Наличие антител не указывает на FIP, а отсутствие антител не исключает его.Многие авторы согласны с тем, что одни серологические данные имеют ограниченную диагностическую ценность. ПЦР-анализы могут напрямую определять геном FCoV, но, хотя они кажутся более чувствительными для выявления коронавирусной инфекции у кошек, результаты должны интерпретироваться в сочетании с другими клиническими данными и не могут использоваться в качестве единственного критерия для диагностики FIP. . Окончательный диагноз FIP должен быть подтвержден гистопатологией или обнаружением внутриклеточного антигена FCoV с помощью иммунофлуоресцентного или иммуногистохимического окрашивания.

Благодарность

Авторы выражают благодарность доктору Дайан Адди (www.

No related posts.