Как выявить токсоплазмоз у кошки: Сдать анализ на токсоплазмоз кошке в ветеринарной клинике «Ветмир»

Содержание

Сдать анализ на токсоплазмоз кошке в ветеринарной клинике «Ветмир»

Клиника «Ветмир» предоставляет возможность сдать различные анализы домашних животных с целью выявить определенные отклонения и назначить эффективное лечение, в том числе сдать анализ на токсоплазмоз кошке. Если ваше животное находится в группе риска или вы заметили тревожные симптомы – не откладывайте посещение ветеринара.

Токсоплазмоз – это опасное заболевание, которое, если не уделить ему должного внимания, может привести к серьезным последствиям. Болезнь по общим признакам похожа на простуду или отравление, поэтому требуется проведение анализов для уточнения диагноза. Быстро получить результаты, а также рекомендации по лечению токсоплазмоза у кошки можно в ветеринарной клинике «Ветмир».

Токсоплазмоз у кошек: особенности заболевания и группа риска

Токсоплазмоз – это инфекция у кошек, которую вызывают паразитические личинки токсоплазмы. Заражению способствует употребление в пищу зараженных мышей, свинины или баранины. Заразиться кошка может также при контакте с инфицированным кошачьим калом.

Больше всего токсоплазмозу подвержены:

  • кошки в возрасте до 1 года;
  • взрослые коты в возрасте 7-8 лет;
  • животные, имеющие свободный доступ к улице;
  • коты, болеющие инфекционными заболеваниями.

Иммунитет животных данных категорий недостаточно крепок, поэтому организм практически беспомощен перед вирусами.

Симптомы токсоплазмоза

Токсоплазмоз прогрессирует в организме постепенно. Личинки развиваются и размножаются в тонком кишечнике, а также могут паразитировать в органах кроветворения: печени и селезенке.

Развитие заболевание у кошек сопровождается следующими симптомами:

  • пассивность, вялость;
  • потеря аппетита и снижение веса;
  • расстройство стула, рвота;
  • чихание и кашель;
  • повышение температуры;
  • судороги (в запущенных случаях).

При обнаружении данных симптомов необходимо как можно быстрее показать кошку ветеринарному врачу. Диагностирование токсоплазмоза осуществляется путем анализа кала на обнаружение цист токсоплазмы или крови на наличие антител к возбудителю.

Ветеринарная клиника «Ветмир» оборудована собственной лабораторией, что позволяет проводить исследования, ставить диагнозы и назначать лечение в максимально сжатые сроки.

Ветеринарные клиники, токсоплазмоз, болезни кошек

Возраст: встречается у животных любого возраста

Симптоматика: различные — повышенная температура, кашель, одышка, гнойные выделения из глаз и носа, потеря аппетита, мышечная дрожь;

Одним из самых распространенных инфекционных заболеваний является токсоплазмоз. Его выявляют у различных видов млекопитающих, птиц, так же болезнь заразна для человека.

Данное заболевание довольно известно и нередко как сопровождается множеством мифов, так и вызывает вполне обоснованное опасение у владельцев домашних питомцев. Токсоплазма является одним из паразитов, способных при инфицировании проникнуть через плаценту непосредственно в плод, который находится в стадии развития, что способно привести к рождению мертвого плода, очень тяжелым уродствам у потомства, нередко — к выкидышу. Для того, чтобы не допустить заражение, а потом рождение младенца с серьезными осложнениями, женщине, которая ждет малыша, доктора нередко предлагают убрать из дома кошку. Правильно ли они делают? Риск заражения настолько большой?

Кошка – это последний хозяин данного паразита. Дело в том, что только в ее организме осуществляется половое размножение этого возбудителя, который попадает во внешнюю среду через кал. В свою очередь через корм, который загрязняется в земле, возбудитель попадает в организм разных животных. Животные способны неоднократно заражаться этой болезнью и переносить её, однако в виду её специфики, течения, последующих стадий и реакции здорового иммунитета на неё, для потомства самих кошек она опасна всего раз — при самом первом заражении.

  • Сначала симптомы данного заболевания у домашнего питомца почти незаметны, поэтому многие даже не обращают на них никакого внимания. Это незначительные выделения из носа, покраснения глаз, диарея. У кошки может немного снизиться аппетит, что приводит к уменьшению веса. Со временем эти симптомы проходят.
  • Во время подострого токсоплазмоза поражаются органы дыхания, что проявляется в виде чихов, кашля, повышается температура, глаза краснеют, а затем появляются гнойные выделения.
  • При остром токсоплазмозе признаки подобные, только более ярко выраженные. Кошка сильно худеет, почти не ест, появляется слюнотечение, мышечная дрожь, одышка, поражается нервная система. Именно этот период болезни кошек является заразным.

Кошка может заразиться токсоплазмозом, когда съедает зараженное мясо грызунов или иной зараженный корм. Что касается собак, то у них также на начальной стадии симптомы незаметны, зачастую их из вида упускают, а у них токсоплазма содержится в слюне — и они способны заразить хозяев, облизав их.

На начальной стадии заболевания кошки и собаки заразны для своих владельцев, а болезнь этих домашних любимцев в хронической форме совершенно не опасна для человека. Так же из-за особенности развития бактерий в фекалиях и требуемого на это времени невозможно заразиться посредством контакта со свежим калом, из чего следует, что зачастую проблем можно избежать, соблюдая простейшие правила гигиены и ухода за животным. Гораздо более велик шанс заразиться токсоплазмозом от собаки, которая более уязвима на прогулке при контакте с землёй или инородными объектами, которые она способна подобрать или облизать. По данным исследований, значительный процент заражения людей данным заболеванием и не связан с домашними животными вовсе — источником вируса может стать в том числе и плохо прожаренное мясо.

И если у вас еще есть какие-то сомнения на счет этой коварной болезни, можно обращаться в ветеринарные клиники — в Ami’s возможно как провести обследование животного, так и получить необходимую консультацию.

Питомник шотландских кошек Style Jasmine г. Санкт-Петербург

Беременность, токсоплазмоз и кошка.

— У меня жена в положении. Можно ли проверить кошку на токсоплазмоз? – один из часто задаваемых вопросов в ветеринарных клиниках

Давайте разберемся, что же такое токсоплазмоз и какова  опасность заражения им может исходить от кошки.

Токсоплазмоз — паразитарное заболевание человека и животных, вызываемое токсоплазмами. Источник инвазии — различные виды (свыше 300) домашних и диких млекопитающих (кошки, собаки, кролики, хищники, травоядные, грызуны) и птиц (около 60 видов).

Почему же в этом заболевании винят именно кошку? Потому что половое размножение токсоплазм происходит только в кишечнике кошек. Они — окончательные хозяева паразита. Но так ли опасны именно кошки?

Toxoplasma gondii

Что же за зверь такой – токсоплазма? Это простейшие внутриклеточные паразиты, напоминающие под микроскопом дольки апельсина. Цисты – мешочки с токсоплазмами — попадают в почву через фекалии заболевших кошек, и уже оттуда с водой, землей, ветром, с пылью на обуви и колесах автомобилей распространяются дальше. С загрязненным землей кормом эти цисты попадают в организм других животных – собак, мышей, крыс, а также сельскохозяйственных, мясо которых затем идет в пищу.

Чем опасен токсоплазмоз? Токсоплазма — один из тех паразитов, которые могут через плаценту проникать в развивающийся плод, вызывая выкидыши, мертворождения, врожденные патологии у младенцев.  

Токсоплазмоз у кошек

Источники заражения В городе основным переносчиками токсоплазмоза являются бездомные кошки и собаки, поедающие загрязненный токсоплазмами корм с земли или зараженных грызунов – мышей или крыс. Домашние же кошки заражаются токсоплазмозом через питание сырым или недоваренным мясом, а так же через цисты, которые хозяева приносят домой с уличной пылью и грязью.

Симптомы Токсоплазмоз у кошек часто протекает без особых симптомов. Например, у здорового животного симптомы заражения могут выражаться лишь в увеличении лимфоузлов. Этот инкубационный период длится 1-6 недель. Затем заболевание переходит в скрытую (латентную), подострую и острую форму. 

Латентная форма токсоплазмоза наиболее частая. При ней симптомы заболевания настолько незначительны, что хозяева обычно не придают им значения: покраснение глаз, небольшие выделения из носа, кратковременный понос, незначительное снижение веса, временная потеря аппетита. При переходе заболевания в хроническую стадию эти симптомы исчезают.

При подостром токсоплазмозе наблюдаются повышение температуры тела, покраснение глаз и появление из них гнойных выделений, поражение легких (кашель, учащенное дыхание).

При остром токсоплазмозе симптомы те же, но выражены сильнее. Кроме этого, кошка может отказываться от еды, у нее появляются слюнотечение, одышка, мышечная дрожь, потеря веса. При поражении нервной системы могут возникнуть изменение координации, судороги и даже паралич.

Диагностика Понять, что животное больно токсоплазмозом, бывает достаточно сложно. Почему?

При заражении токсоплазмами в организме развивается ответ со стороны иммунной системы. Поэтому циркуляция (размножение, движение и поражение новых клеток) токсоплазм в организме ограничена по времени. При повторном заражении под действием иммунитета токсоплазмы уже не формируют цисты в кишечнике. В результате токсоплазмы поражают клетки внутренних органов и оказываются «заблокированными» в них.

Такое состояние может сохраняться всю жизнь без внешнего проявления.

Если первичное заражение здоровых животных вызывает незначительные симптомы, то последующие заражения происходят вообще без них.

Симптомы токсоплазмоза проявляются, когда организм кошки ослаблен и иммунный ответ развивается очень медленно или не развивается вовсе.

Определить токсоплазмоз у кошек сложно еще и потому, что при ранних проявлениях заболевания анализ кала на цисты токсоплазм еще может не выявить заражения.

Как же выяснить, есть у кошки токсоплазмоз?  В крупных городах в ветклиниках животным проводят иммунологический анализ на токсоплазмоз. То есть сделать такой анализ можно не везде.

Симптомы токсоплазмоза настолько неспецифичны, что зачастую кошкам ставят диагноз «токсоплазмоз», хотя те страдают от другой болезни с похожими клиническими признаками. Нельзя ставить диагноз без лабораторных исследований(!).

Опасность токсоплазмоза для кошки Токсоплазмоз у кошек может привести к выкидышам, мертворождениям или рождению нежизнеспособного потомства. НО! Проникновение заражения через плаценту возможно только при первой циркуляции токсоплазм по организму, то есть если животное впервые заразилось токсоплазмозом незадолго до беременности или во время нее. При хронической же форме заболевания этому препятствует действие иммунной системы. Поэтому врожденный токсоплазмоз потомства у кошек возникает однократно (!). 

Лечение Лечение токсоплазмоза у кошек проводится под контролем ветеринарного врача. Оно сводится к назначению сульфаниламидных препаратов до исчезновения в крови антител, а в кале — цист. Лечится токсоплазмоз трудно и долго. Важную роль в выздоровлении играет клеточный иммунитет. Чем старше животное, тем быстрее развивается иммунный ответ организма. Часто заражение возникает у животного с ослабленным иммунитетом, и его лечение не эффективно.

Профилактика Чтобы кошка не заболела токсоплазмозом, ее надо кормить только готовыми промышленными сухими или консервированными кормами, не давать ей сырое или полусырое мясо, и постараться, чтобы она не охотилась на грызунов.

Беременность женщины и токсоплазмоз

Опасность токсоплазмоза для человека  К сожалению, у людей токсоплазмы особенно склонны поражать нервную систему и мозг. Возникающие в мозге очаги разрушения затем окружаются фиброзной капсулой и кальцинируются. В дальнейшем эти очаги могут стать причиной нарушения нормальной работы центральной нервной системы.

Для беременных женщин заражение токсоплазмозом опасно из-за того, что проникшие через плаценту к плоду токсоплазмы способны вызвать серьезные нарушения в его развитии. Наиболее тяжелые последствия заражения происходят в первый триместр беременности, но чаще всего это заканчивается выкидышем и редко —  рождением ребенка со значительными нарушениями в развитии.

Часто беременной женщине врачи предлагают избавиться от кошки, чтобы предотвратить заражение и рождение ребенка с патологиями. Насколько это оправдано?

Представления о токсоплазмозе и о роли животных в его передаче часто ошибочны не только у обычных людей, но даже у специалистов — врачей и ветеринаров. Неверная информация об этой инвазии зачастую приводит к «токсоплазмозофобии» — паническому страху перед домашними животными. 

Немного статистики: Из исследований американских и венгерских статистов следует, что только 0,5-1% беременных женщин в США и Европе оказываются заражены токсоплазмозом, и только у 40% из них он переходит к плоду. И лишь малая часть зараженных плодов показывает явные признаки заболевания. И почти во всех случаях причиной заражения послужило недостаточно прожаренное мясо.

Шашлык гораздо опаснее кошки!

Развенчиваем мифы

Миф первый: токсоплазмозом можно заразиться, убирая кошачий туалет  Для того, чтобы токсоплазмы стали заразными, им необходимо созреть, на это требуется от одного до пяти дней! Поэтому нельзя заразиться токсоплазмозом, удаляя свежие фекалии кошки. Следует ежедневно убирать кошачий туалет, смывать с него следы фекалий, а затем мыть руки.

Миф второй: заразна любая заболевшая кошка  После заражения кошки токсоплазмозом выделение цист продолжается до трех недель, потом этот процесс прекращается. Поэтому источником заражения являются фекалии только тех кошек, которые заразились недавно.

Кошка является заразной для человека в период подострых или острых проявлений токсоплазмоза. Например, ухаживая за больным животным, можно вдохнуть токсоплазмы, которые выделились при чихании кошки (на воздухе они погибают в течение нескольких минут). Затем токсоплазмоз у кошки переходит в латентную хроническую стадию и может проявляться лишь в виде временного поноса. В этот период, продолжающийся пожизненно, токсоплазмы у кошки «заблокированы» внутри клеток, и никакие выделения животного их не содержат. Поэтому хронический токсоплазмоз кошки не заразен для хозяев.

Но надо помнить, что кошка вновь становится на некоторое время заразной при каждом новом заражении (!), которое может произойти, если она получает сырое мясо или охотится на мышей или, гуляя, заражается через цисты других кошек.

Миф третий: страшнее кошки зверя нет  В период развития заболевания могут быть заразны и собаки. Токсоплазмы могут содержаться в их слюне. При облизывании собакой хозяина токсоплазмы через царапины или слизистую оболочку глаза, рта или носа проникают в организм человека. Во время ежедневных прогулок собака может подобрать что-нибудь с земли или, валяясь на земле, набрать цисты токсоплазм на шерсть. Потом эти цисты попадают в дом, а там через пыль или загрязненные поглаживанием собаки руки – в организм хозяина. Таким образом, собаки — более вероятный источник заражения токсоплазмозом для человека, чем кошки.

Миф четвертый: домашние животные – основная причина токсоплазмоза  Непосредственно от больного животного человек заражается редко. Основные источники заражения людей — загрязненная цистами земля, уличная пыль, а, главное, — мясо, не прошедшее достаточную термическую обработку. В этом отношении плохо прожаренный шашлык опаснее, чем домашняя кошка. Дети могут заразиться, играя в песочнице.

Симптомы: Первичное заражение обычно маскируется под вирусное простудное заболевание. Затем токсоплазмоз переходит в хроническую латентную стадию. При этом клинические признаки заметны, если иммунная система ослаблена. 

Диагностика  На сегодняшний день существует несколько методов диагностики токсоплазмоза, например, наиболее достоверный — иммуноферментный анализ (ИФА), его делают все известные клиники. И если свою беременность женщина планирует, то ей следует заранее сдать все необходимые анализы, в том числе и на токсоплазмоз.

Токсоплазмоз при беременности  Особенно опасно заражение токсоплазмозом во время беременности или непосредственно перед зачатием. Анализ на токсоплазмоз позволяет определить, заражена ли женщина токсоплазмозом, и как давно произошло заражение.

Если заражение произошло задолго до беременности, то женщина может не бояться общения с животными. У переболевшей токсоплазмозом женщины вырабатываются антитела и стойкий иммунитет.

Если заражение произошло недавно, следует подумать о риске для здоровья будущего ребенка. Наиболее тяжелые врожденные нарушения развиваются при поражении в первом триместре беременности.

Если же анализ на токсоплазмоз отрицательный, следует соблюдать особую осторожность, учитывая все возможные пути заражения.

У человека трансплацентарная передача токсоплазмоза возможна только один раз. Поэтому при последующей беременности невозможно рождение второго ребенка с врожденной патологией.

Профилактика  Заражение токсоплазмозом можно предотвратить, соблюдая определенные правила:

~ Следует тщательно проваривать и прожаривать мясо, не пробовать сырой фарш, помнить, что следы мяса могут остаться на ноже, разделочной доске и кухонной тряпке. После приготовления мяса – тщательно мыть руки.  Так же не стоит употреблять в пищу парное молоко и сырые яйца

~ Тщательно мыть фрукты и овощи

~ В этот период не следует кормить кошку или собаку сырым мясом. Беременной женщине не следует целовать домашних питомцев и позволять себя облизывать. При появление любых необычных симптомов у домашнего животного лучше поручить заботу о нем другим членам семьи. И уж, конечно, в это время не надо заводить котенка, особенно взяв его с рук или на Птичьем рынке, так как у молодого животного слабее иммунитет, а приобрести токсоплазмоз малыш мог еще внутриутробно

При работе с землей в саду или огороде надо обязательно использовать резиновые перчатки, а после работы тщательно мыть руки

Всегда мыть обувь и руки после улицы и после того, как гладили животных

Токсоплазмоз коварен, но предсказуем. А любимая кошка может продолжать служить источником радости для своей хозяйки во время беременности и после появления малыша.

При написании статьи использованы материалы www.zoovet.ru

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Токсоплазмоз человека и животных.

Дата публикации: 26.10.2018 14:34

Зайцев В.С., Вирцер М.А.

Токсоплазмоз – инфекционное заболевание причиной которого является внутриклеточный паразит вида Toxoplasma gondii (Tgondii). Он относится к простейшим отряда кокцидий и может заражать большинство теплокровных животных, в том числе и человека.

Рис.1 Циркуляция токсоплазмы.

Циркуляцию токсоплазм в природе обеспечивают два хозяина — окончательный и промежуточный.

Окончательными хозяевами — хранителями возбудителя в природе, у которых идет его половой процесс развития (кишечная фаза), являются представители семейства кошачьих. Бесполое развитие токсоплазм (внекишечная, тканевая фаза) проходит в органах промежуточных хозяев: различных домашних животных и диких млекопитающих, птиц и человека. В природных очагах круг промежуточных хозяев включает почти все виды млекопитающих и птиц.

Кошки (основные хозяева) заражаются пероральным путем при поедании тканей промежуточного хозяина, в которых содержатся любые стадии токсоплазмы (эндозоиты, псевдоцисты, тканевые цисты), а также при проглатывании ооцист, выделенных на почву с испражнениями инвазированной (зараженной) токсоплазмами кошки.

Заражение человека или промежуточных хозяев происходит преимущественно пероральным путем при проглатывании ооцист или при употреблении в пищу мяса инвазированных животных (рис.1). При разрушении ооцист и тканевых цист в пищеварительном канале промежуточного хозяина освободившиеся эндозоиты проникают в клетки слизистой кишечника и по лимфатическим и кровеносным путям распространяются в другие органы и ткани, продолжая развитие до образования псевдоцист, где затем инкапсулируются и находятся в латентном состоянии.

Важно понимать, что заражение возможно не только от кошки, но и от промежуточного хозяина, когда у него наблюдается активная фаза бесполого размножения. Так у собак эндозоиды (активная фаза инфекции) выделяются вместе со слюной, и в этом случае при непосредственном контакте возможно заражение токсоплазмозом(Etheredge GD, 2004).

У кошки же токсоплазма с фекалиями выделяется только в течении 1-2 недель (половая фаза размножения токсоплазм), и далее она более выделять возбудителя не будет.Кроме того, ооцисты, выделяемые с калом, не обладают инфицирующей способностью до споруляции (процесс образования спор), что обычно происходит в течение 1-5 дней после попадания во внешнюю среду.

В большинстве случаев наблюдаются бессимптомное паразитоносительство или хроническое течение без характерных симптомов (если паразиты обладают низкой патогенностью). В редких случаях заболевание протекает остро: с подъемом температуры, увеличением периферических лимфатических узлов, появлением сыпи и проявлениями общей интоксикации. Это определяется индивидуальной чувствительностью организма и путями проникновения паразита.

Показания для проведения исследований на наличие токсоплазмы

  • Заболевания дыхательных путей, ЦНС, печени, сердца, глаз, скелетных мышц, ЖКТ или при одновременном нарушении функций нескольких органов.

  • При мертворождении и рождении слабых котят у кошек.

  • Перед началом иммуносупрессивной терапии.

  • При подтвержденном диагнозе ВИК.

Рекомендуемые методы диагностики.

Одним из методов диагностики является серологический (ИФА и его разновидности) с выявлением специфических иммуноглобулинов. Для определения активной фазы заболевания необходимо проводить исследование концентрации (титра) IgM (начинают определяться в сыворотке крови через 1-2 недели после инфицирования и исчезают спустя 12 недель после развития острой инфекции). Но, поскольку тест-систем на IgM для животных на российском рынке нет (а человеческие не подходят для этих целей), необходимо оценивать изменение титра IgG к T.gondii в организме животного c повторным определением титра IgG через 2-4 недели. Для точной интерпретации динамики титра IgG следует первый образец сыворотки крови заморозить для того, чтобы затем ее анализировать одновременно со вторым, взятой через 2-4 недели. Обе пробы необходимо сдавать одновременно в одну и ту же лабораторию. Результат интерпретируют как «положительный» при уверенном увеличении титра антител (Vaden S. 2013).

Кошки серопозитивные на IgG не представляют опасности для заражения, поскольку период распространения ооцист уже закончился, а повторное их выделение возможно только при иммуносупрессивных состояниях (например, при ВИК). Поэтому само носительство T.gondii и наличие IgG является скорее благоприятным признаком.

Алгоритм диагностики с помощью метода ИФА занимает продолжительный период времени (около месяца) и является непрямым. Поэтому более предпочтительно непосредственное определение возбудителя методом ПЦР, который выявляет токсоплазму в период ее выделения во внешнюю среду, когда она представляет опасность для заражения. Используя этот метод результаты исследований можно получить в течение суток.

Материалом для выявления токсоплазмы у кошек являются фекалии. У других же видов животных (промежуточных хозяев) выявление возбудителя T.gondii осуществляется из крови и слюны, что связанно с циклом развития. При обнаружении токсоплазмы в любом из материалов можно сделать заключение о том, что обследуемое животное заражено и представляет потенциальную опасность для окружающих.

ДРУГИЕ СТАТЬИ: Статьи

Профилактика токсоплазмоза у кошек

Когда у вас дома живет котик, то обязательно нужно знать, что питомец может заразиться токсоплазмозом. Что это за опасное заболевание? Речь об этом пойдет. Это серьезный недуг, вызываемый паразитами Toxoplasma gondii. К домашним любимцам нужно быть предельно внимательными, чтобы не допустить заражение и вовремя сделать прививку от токсоплазмоза для кошек.

Формы токсоплазма

Внутри животного во время заболевания находится 3 формы вируса, это:

  1. Цисты. Они имеют плотную оболочку, и через нее не проникают лекарственные препараты. Возбудитель очень устойчив к окружающей среде и погибает при температуре ниже -4 и выше 37 градусов.
  2. Трофозоиты. Размножаются во всех клетках организма в период острой стадии.
  3. Ооцисты. Формируются в тонком кишечнике у кошек и выделяются с каловыми массами. Это основной источник заражения. Через 2 дня из каловых масс начинают выделяться споры, которые переносятся по воздуху и сохраняют способность распространять инфекцию в течение года. В свежих фекалиях находятся ооцисты, которые не способны заразить другой вид животного или человека, поэтому убирая лоток за больным животным сразу, заразиться токсоплазмозом человеку невозможно.

Пути передачи

Токсоплазма выделяется в течение месяца с калом только у кошек, которые заразились недавно. Далее заболевание переходит в латентную форму, и животное опасности не представляет. При повторном заражении иммунитет подавляет распространение вируса, и он не доходит до размножения в кишечнике.

Благодаря стойкости во внешней среде и пути передачи через воздух, воду, пищу, предметы, животных, токсоплазмозом заражены практически все уличные коты и более 50 % населения мира.

Симптомы токсоплазмоза у котов

Сразу после того, как вирус попал в организм, он начинает размножаться. До того, как количество клеток, захваченных паразитами, дойдет до ощутимого поражения организма, обычно проходит 1-4 недели. Только после этого у кошки, в зависимости от состояния здоровья и возраста, болезнь начнет протекать в латентной, средней или острой форме.

Симптоматика и проявления болезни, в зависимости от формы, следующая:

  1. Скрытая форма имеет самые слабовыраженные симптомы и встречается у кошек в возрасте от 1 до 7 лет. Выражается заболевание в виде покраснения глаз и насморка. Реже встречается кратковременный отказ от еды и снижение аппетита на короткое время. Хозяева списывают симптомы на простуду, конъюнктивит или пищевое отравление.
  2. Средняя форма. Глаза краснеют, появляются гнойные выделения. Из-за поражения слизистой и органов дыхания у животного появляется насморк, кашель, чихание, дыхание становится затрудненным. Вялость, отказ от еды. Значительное расстройство стула. Повышается температура тела. Начиная с этой стадии, животное становится опасным для человека, т. к. заражение происходит через все выделяемые жидкости.
  3. При острой форме все симптомы становятся более выраженными. Апатия, животное не встает, безучастно ко всему. Сильная лихорадка. Слюнотечение. На этой стадии вирус затрагивает нервную систему, поэтому возникают подергивания кончиков ушей и конечностей, мышечные судороги. В самом тяжелом случае – паралич.

Анализ на токсоплазмоз

Чтобы установить точный диагноз, одного осмотра животного недостаточно, даже если присутствуют многие признаки болезни. Для доказательства попадания в организм именно этой инфекции проводится ряд анализов.

Серологический анализ — самый точный анализ, который определит наличие иммуноглобулинов в крови. Если в анализе обнаружены антитела IgM и отсутствуют IgG, это свидетельствует об остром течение болезни, заражение произошло недавно.

Показатели IgM и IgG говорят о том, что иммунитет начал борьбу с вирусом и болезнь пошла на спад. Антитела IgG обнаруживаются через месяц после заражения и сохраняются в течение всей жизни, с постепенным понижением титра.

Если в анализе присутствует только IgG, это значит, что животное было заражено давно и сейчас вирус никакой опасности не представляет.

Проводят анализ на наличие ооцист. У кошки берется мазок из заднего прохода, после чего свежесобранный кал окрашивается специальным раствором, который выявляет наличие вируса. Этот анализ наименее информативен, потому что при появлении симптомов организм животного практически перестает выделять ооцисты, т. к. с момента заражения до появления симптомов проходит более двух недель.

ПРЦ исследование — это самый точный, но и самый дорогой вид анализа. Позволяет выявить вирус в любых видах биоматериала.

Лечение болезни

После постановки диагноза лечение назначают только при тяжелых симптомах заболевания, ослабленным кошкам, беременным, котятам до года, либо пожилым животным в возрасте от 10 лет. После начала лечения симптомы сходят на нет быстро, в течение 1-2 суток, но давать препараты следует весь назначенный курс, в среднем он занимает 6-7 дней. Самостоятельно в средней и легкой форме болезнь проходит в течение недели.

Токсоплазмоз и беременность кошек

А вот передается ли токсоплазмоз котятам во время беременности? Если у беременной кошки произошло первичное инфицирование токсоплазмозом, в таком случае заболевание имеет серьезные последствия для потомства. Возможны выкидыши на ранних сроках, мертворождение, рождение живых котят с дефектами, несовместимыми с дальнейшей жизнью. Прививку от токсоплазмоза для кошек в период беременности делать не рекомендуют.

Если инфицирование произошло на поздних сроках беременности, котятам это грозит глухотой, снижением зрения или полной слепотой, задержкой физического и умственного развития, что в дальнейшем приведет к невозможности обучить кота жить в квартире. Кот не будет приучен ходить на лоток, не будет отзываться на имя, понимать, что нельзя точить когти об диван и не царапать хозяев.

Если кошка уже болела, то повторное заражение не повлияет на развитие котят. Иммунные клетки не пропустят паразитов через плацентарный барьер.

Можно ли вылечить кошку прививкой?

Если вспомнить, что вызывает болезнь, то становится ясно, что вакцинация кошек от токсоплазмоза не поможет побороть недуг. Вакцина защищает организм посредством введения малых доз вируса, с целью дать организму побороть его, выработать защитные антитела и в дальнейшем не допустить распространение вируса в организме при повторном контакте.

Токсоплазма – это паразит, он находится внутри клетки, поэтому вакцина на него не подействует.

Прививка от токсоплазмоза для кошек не вылечит животное, поэтому хозяевам нужно внимательно отнестись к профилактике заболевания. А если все же произошло заражение, нужно знать признаки течения и своевременно обратиться к ветеринарному врачу.

Профилактика токсоплазмоза

Лучше соблюдать профилактику токсоплазмоза у кошек, чем лечить их от заболевания. Домашних кошек гораздо проще уберечь от заражения, чем тех, кто живет в частном доме или выходит на улицу. Это связано с путями заражения, ооциты могут находиться практически в любом месте.

Приходя домой, следует придерживаться следующих правил:

  1. Ограничить контакт кошки с уличной обувью и одеждой.
  2. Мыть руки после улицы перед тем, как погладить встречающего питомца. Следить за гостями, чтобы они тоже выполняли это правило.
  3. Мыть пачки корма, которые принесены из зоомагазина. Принести на них источник токсоплазмы легче легкого. Тем более, его каждый день придется трогать руками.
  4. Кормить кота промышленными кормами. Если животное на натуральном питании и ест сырое мясо, перед кормлением его следует подвергнуть длительной заморозке.
  5. Варить мясо нужно до полной готовности.
  6. Не допускать ловли грызунов и птиц. На окнах должны стоять москитные сетки, чтобы избежать возможного покушения на севшую на подоконник птицу.
  7. Питьевая вода должна быть только кипяченой, фильтрованной или бутилированной. Ей же должно мыться все, что попадает в пищу коту, если он ест овощи и фрукты.
  8. Если хозяева решают завести еще одного питомца, он должен пройти карантин не менее трех недель. Контакт между животными разрешен после этого срока и анализа на наличие паразитов в крови.

Укрепление иммунитета кошек

Укреплению иммунитета нужно уделить особое внимание. Ведь, если здоровое животное все же заразиться токсоплазмозом, оно перенесет его в легкой форме, практически незаметно и без вреда для здоровья.

Ежегодно, даже при хорошем самочувствии, кошке необходимо делать общий и биохимический анализ крови, чтобы исключить начинающиеся проблемы, которые не успели сказаться на самочувствии. Ежемесячно необходимо обрабатывать кота от блох и раз в 3 месяца от глистов, делать прививку от токсоплазмоза для кошек. Питание должно быть сбалансированным, корма класса премиум. По возможности, избегать стрессов.

Самая главная защита от болезней – ежегодная вакцина от токсоплазмоза.

Что еще необходимо знать?

Какие прививки обязательно делать кошкам

Вакцинация защитит животное от самых распространенных болезней, тем самым не дав упасть иммунитету в период недуга.

За 14 дней до первой прививки животное нужно обработать средством от блох и далее, через 3 дня дать таблетку от глистов. Ровно через 10 дней после глистогонного препарата котенку делается первая прививка при условии, что глистов в кале не обнаружено. Если есть сомнения, стоит дать лекарства повторно после консультации с ветеринаром.

В 2 месяца котенок прививается от кальцивироза (воспаление слизистых оболочек и коньюктивиты), ринотрахеита (болезнь влияет на органы дыхания и вызывает сильнейшее воспаление глаз, смертность в 20% случаев), панлейкопении (чумка, смертность более 90%) и хламидиоза (лихорадка и воспаление слизистой век и носа).

Повторно вакцина вводится через 21, максимум 28 дней + ставится вакцина против бешенства.

Ежегодно должна проводиться ревакцинация, ведь действие прививки заканчивается ровно через год. Если просрочить плановую прививку больше, чем на месяц, придется создавать защиту, как и котенку, в два этапа

Ответ на вопрос положительный, делают ли кошкам прививку от токсоплазмоза. Но прививки можно делать только здоровым животным, котятам в возрасте от 8 недель. Если у котенка меняются зубы (возраст от 4 до 6 месяцев), вакцинацию проводить нельзя. Поэтому важно все сделать вовремя, когда ему исполнится 2 месяца, чтобы не оставлять животное без защиты более, чем на полгода.

Зная, что это — токсоплазмоз, заботливый хозяин всегда защитит своего домашнего любимца. И тогда он подарит вам много позитива и радости каждый день.

Токсоплазмоз у детей — Into-Sana

Токсоплазмоз — это паразитарная инфекция, которая характеризуется полиорганностью поражения вследствие способности возбудителя проникать почти во все органы и ткани, а также хроническим (латентным) или острым течением. Уровень инфицированности достаточно высокий, однако манифестные формы с яркой клинической симптоматикой развиваются не у всех. Особенно опасно это заболевание для детей. Нередко инфицирование происходит еще внутриутробно — от матери, заразившейся токсоплазмозом во время беременности. Однако и после рождения дети подвержены данному заболеванию, что можно связать с особенностями основных механизмов передачи болезни.

Причины возникновения токсоплазмоза

Непосредственной причиной развития этого заболевания является заражение паразитом — токсоплазмой, которая имеет достаточно сложный жизненный цикл. Источником инфекции являются домашние и уличные кошки (основной и окончательный хозяин токсоплазмы). Несколько реже источником заболевания могут быть грызуны, птицы, рогатый скот и другие сельскохозяйственные животные. Зараженные животные выделяют с фекалиями зрелую форму токсоплазмы (ооцисты), которая, проникая в организм, и вызывает заболевание. Ооцисты достаточно стойки к неблагоприятным факторам внешней среды, и могут продолжительное время находиться в зараженной земле.

Передача заболевания может происходить несколькими путями:

  • Внутриутробное заражение, или вертикальная передача — инфицирование происходит от матери, больной токсоплазмозом, при этом первичное инфицирование токсоплазмой должно произойти во время беременности. Данный механизм передачи крайне опасен для еще не родившегося ребенка, поскольку может привести не только к формированию аномалий развития, но и к гибели плода.
  • Вследствие употребления инфицированных продуктов питания (чаще всего это грязные овощи, ягоды), а также воды. Возможно также инфицирование при употреблении недостаточно термически обработанного мяса животных, которые были заражены токсоплазмозом.
  • При отсутствии гигиенических навыков (мытье рук после контакта с животными, на шерсти которых могут находиться ооцисты).
  • После переливания крови, трансплантации органов от человека, инфицированного токсоплазмой.

Типы и формы токсоплазмоза

В зависимости от способа инфицирования выделяют врожденную и приобретенную форму заболевания.

По характеру течения принято разделять это заболевание на:

  • Острый, который протекает с выраженной клинической симптоматикой.
  • Хронический — может иметь периоды обострения и ремиссии, однако чаще протекает латентно, без выраженной картины заболевания.

Учитывая поражение того или иного органа токсоплазмой, выделяют следующие виды токсоплазменной инфекции:

  • Токсоплазмозная окулопатия.
  • Токсоплазмозный гепатит.
  • Токсоплазмозный менингоэнцефалит.
  • Легочной токсопазмоз.
  • Токсоплазмоз, поражающий другие органы:
    • токсоплазмозный миокардит;
    • токсоплазмозный миозит.
  • Неуточненный токсоплазмоз.

Симптомы токсоплазмоза у ребенка

Клиническая картина данной патологии у детей может быть разной в зависимости от того, врожденная она или приобретенная.

Врожденный токсоплазмоз крайне негативно сказывается на развитии плода и способен вызвать его гибель, в особенности если инфицирование произошло в первые 12 недель внутриутробного развития. При инфицировании на поздних сроках у больного ребенка сразу после рождения можно выявить следующие признаки:

  • Тяжелые поражения нервной системы: микроцефалия (уменьшение черепа и головного мозга), гидроцефалия, судороги, эпилепсия. В дальнейшем такие дети отстают в физическом и умственном развитии.
  • Увеличение печени, желтуха.
  • Повышение температуры тела до 38°С, однако нередко температура может быть нормальной.
  • На кожных покровах наблюдается сыпь разнообразного характера.
  • Все группы лимфатических узлов увеличены.
  • Диарея.
  • В зависимости от формы может возникать пневмония, поражение сердечной мышцы, глаз (а именно хориоретинит — воспалительный процесс в сосудистой оболочке глаза и в сетчатке).

Приобретенный токсоплазмоз выявляется у детей в старшем возрасте, при этом первичное инфицирование довольно часто протекает бессимптомно. В таких случаях диагностика заболевания возможна только при проведении лабораторных исследований, в которых определяют наличие специфических антител, указывающих на инфицированность токсоплазмой.

Если же приобретенный токсоплазмоз протекает манифестно (с наличием симптоматики), у ребенка могут отмечаться следующие признаки:

  • Начало болезни чаще постепенное, температура тела повышается незначительно, до 37,5°С, однако возможно и острое начало с температурой до 39°С. Лихорадка зачастую сопровождается мышечной болью, ознобом.
  • Состояние ребенка ухудшается. Появляются жалобы на головную боль, слабость.
  • Увеличение лимфатических узлов (чаще всего поражаются шейные лимфоузлы).
  • Высыпания на коже, которые могут быть разного характера, однако чаще в виде пятен.
  • При поражении ЦНС возникает сильная головная боль, непрекращающаяся рвота, возможны судороги, бред.
  • Поражение сердца, которое проявляется слабостью, одышкой, аритмией, снижением артериального давления.
  • Поражения глаз — выявляется полная или частичная потеря зрения. Иногда такое проявление является единственным симптомом токсоплазмоза.
  • Боли в животе, диарея.
  • Возможно развитие пневмонии с соответствующими симптомами.
  • Особенностью данного заболевания является то, что он способен поражать несколько органов, что приводит к достаточно разнообразной клинической картине, поэтому компетентно оценить состояние ребенка и заподозрить токсоплазмоз может только врач. При обнаружении у своего ребенка представленных выше симптомов стоит незамедлительно обратиться к специалисту.

Диагностика токсоплазмоза

Начальным этапом диагностики является тщательный осмотр ребенка, а также беседа доктора с родителями, в ходе которой специалист узнает все необходимые анамнестические данные, которые могут косвенно указывать на токсоплазмоз.

Для подтверждения диагноза необходимым является проведение ряда лабораторных исследований:

  • Общий анализ крови. Изменения в нем незначительные, однако проведение данного исследования важно для дифференциации токсоплазмоза от других патологических состояний.
  • Биохимический анализ крови.
  • С целью выявления специфических антител к токсоплазме проводят серологическое исследование. Методом ИФА (иммуноферментного анализа) определяют IgM, характерные для острой фазы болезни и IgG, указывающие на хронический токсоплазмоз.
  • Полимеразная цепная реакция (ПЦР-диагностика), которая основывается на выявлении ДНК токсоплазмы.
  • Микроскопия биологических жидкостей, при которой можно выявить паразита.

Важным этапом диагностики является проведение инструментальных исследований, которые могут различаться в зависимости от поражения того или иного органа. При токсоплазмозе используются следующие методы:

  • ЭКГ (электрокардиография).
  • КТ (компьютерная томография), рентген черепа, на которых выявляются кальцификаты в веществе мозга — отличительный признак данного заболевания.
  • Электроэнцефалография (ЭЭГ) применяется при поражении центральной нервной системы.
  • НСГ (нейросонография).
  • ЭхоКГ (эхокардиография).
  • Осмотр глазного дна.

Методы лечения токсоплазмоза

Лечение ребенка с данным заболеванием проходит в условиях стационара. Терапия должна включать в себя препараты, которые непосредственно влияют на токсоплазму (антипаразитарные препараты), а также десенсибилизирующие средства, антиоксиданты, витаминотерапию. Возможно также применение глюкокортикоидов. Все назначения, а также определение дозировки препаратов и кратности приема медикаментов осуществляет исключительно врач. Самолечение является недопустимым и опасным для ребенка.

Помимо лечения, крайне важна профилактика врожденной формы заболевания. Она помогает избежать развития острого токсоплазмоза у матери и, как следствие, предотвратить гибель плода или инвалидизацию ребенка.

Последствия токсоплазмоза

Нередко заболевание протекает латентно, однако у детей с нарушениями иммунитета (токсоплазмоз относят к маркерным заболеваниям СПИДа), а также при врожденном токсоплазмозе прогноз неблагоприятный, поскольку само течение патологии, даже без осложнений, может привести к инвалидизации ребенка.

Токсоплазмоз – клиника «Семейный доктор».

Беременность – важный период в жизни каждой женщины.  И, конечно, очень важно правильно подготовиться к вынашиванию и появлению на свет здорового малыша.  В течение беременности многие факторы могут повлиять на развитие плода и состояние здоровья женщины. К наиболее частым причинам, которые могут вызвать осложнения беременности, относятся инфекции. Выделяют целый комплекс инфекционных заболеваний, негативно влияющих на плод (ТОRCH-комплекс). Одной из таких инфекция является токсоплазмоз.

Токсоплазмоз – достаточно распространенное паразитарное заболевание, вызванное простейшими (Toxoplasmagondii). Размножение токсоплазм происходит в организме кошек. В конце цикла размножения образуются ооцисты, которые с фекалиями попадают в почву и могут там сохраняться до 2х лет. В дальнейшем, попадая в организм других животных или человека, они вызывают их инфицирование. 

Существует два основных пути заражения людей токсоплазмозом:

1. Алиментарный: употребление термически недостаточно обработанного мяса, грязные руки, употребление зараженных овощей и ягод;

2. Контактный: непосредственный контакт с больными животными, часто встречается у ветеринаров и работников мясокомбинатов (при наличии микроповреждений на поверхности кожи и слизистых оболочек).

Токсоплазмоз очень опасен для беременных женщин. В зависимости от времени заражения, он может вызывать прерывание беременности в ранние сроки, мертворождение, рождение детей с тяжелыми пороками развития. Основными симптомами заболевания являются: головная боль, повышение температуры, вялость, мышечные боли, увеличение лимфатических узлов, воспалительные изменения общего анализа крови. Эти признаки также встречаются при гриппе и многих вирусных инфекциях, поэтому человек не всегда знает о перенесенном заболевании.


В диагностике токсоплазмоза важную роль играет выявление в венозной крови антител: иммуноглобулинов M и G. По их титрам (то есть количеству), а также по авидности (показателю прочности связи антител с возбудителем) можно определить стадию заболевания и примерное время инфицирования.  Эти исследования входят в обязательную программу обследования беременных женщин и по приказу Министерства Здравоохранения проводятся при взятии на учет и перед оформлением декретного отпуска. При планировании беременности также необходимо обследоваться на наличие антител к токсоплазме, так как первичный контакт женщины с инфекцией во время беременности и за 6 недель до зачатия, могут привести к рождению ребенка с врожденным токсоплазмозом. При повторных беременностях передачи токсоплазмоза плоду не происходит.

Наиболее тяжелые поражения плода выявляются при инфицировании в первом триместре беременности. Признаки врожденного токсоплазмоза у плода можно выявить при ультразвуковом исследовании (как правило, на втором скрининговом исследовании в 18-20 недель). К ним относятся: микроцефалия, гидроцефалия, обнаружение кальцинатов в ткани головного мозга плода, увеличении печени и селезенки, скопление жидкости в брюшной, плевральной полостях).

Лечение пациенток с признаками токсоплазмоза подбирается индивидуально, согласно данным обследований и в зависимости от клинической картины и срока беременности. В случае выявления грубых пороков у плода ставится вопрос о прерывании беременности.

Очень важно информировать беременных и женщин, планирующих беременность, о необходимости обследования на токсоплазмоз, а также о мерах профилактики этого заболевания:

  • мыть руки перед приготовлением и употреблением пищи;
  • тщательно мыть все фрукты, овощи, салаты;
  • избегать употребления в пищу сырого, термически не обработанного мяса;
  • носить перчатки при проведении садовых работ и при любом контакте с почвой;
  • избегать контакта с кошачьими испражнениями в кошачьих туалетах или в почве.

Необходимо помнить, что кошки, употребляющие сырое мясо, охотящиеся на улице, часто бывают носителями токсоплазмоза.

Информацию для Вас подготовила:

Сучалко Марина Олеговна — врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики. Ведет прием в Корпусе клиники на Новослободской. 


Диагностика токсоплазмоза и типирование Toxoplasma gondii | Паразиты и переносчики

  • Лю К., Сингла Л.Д., Чжоу Х. Вакцины против Toxoplasma gondii : статус, проблемы и будущие направления. Hum Vacc Immunother. 2012;8:1305–8.

    КАС Google ученый

  • Moncada PA, Montoya JG. Токсоплазмоз плода и новорожденного: обновленная информация о распространенности, диагностике и лечении. Expert Rev Anti Infect Ther.2012;10:815–28.

    КАС пабмед Google ученый

  • Дубей JP. История Toxoplasma gondii – первые 100 лет. Дж Эукариот микробиол. 2008; 55: 467–75.

    ПабМед Google ученый

  • Тентер AM, Heckeroth AR, Weiss LM. Toxoplasma gondii : от животных к человеку. Int J Паразитол. 2000;30:1217–58.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Пол М.Авидность иммуноглобулина G в диагностике токсоплазматической лимфаденопатии и глазного токсоплазмоза. Clin Diagn Lab Immun. 1999; 6: 514–18.

    КАС Google ученый

  • Куомо Г., Д’Аброска В., Риццо В., Нардиелло С., Ла Монтанья Г., Гаэта Г.Б. и др. Тяжелый полимиозит, вызванный Toxoplasma gondii , у взрослого иммунокомпетентного пациента: отчет о клиническом случае и обзор литературы. Инфекция. 2013;41:859–62.

    КАС пабмед Google ученый

  • Neves Ede S, Kropf A, Bueno WF, Bonna IC, Curi AL, Amendoeira MR, et al.Диссеминированный токсоплазмоз: атипичная картина у иммунокомпетентного пациента. Троп Док. 2011;41:59–60.

    ПабМед Google ученый

  • Карме Б., Биссуэль Ф., Айзенберг Д., Буйн Р., Аснар С., Демар М. и др. Тяжелый приобретенный токсоплазмоз у иммунокомпетентных взрослых пациентов во Французской Гвиане. Дж. Клин Микробиол. 2002; 40:4037–44.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Кандольфи Э., де Блей Ф., Рей Д., Кристманн Д., Трейссер А., Паули Г. и др.Паразитологически доказанный случай пневмонии Toxoplasma у иммунокомпетентной беременной. Дж Инфекция. 1993; 26: 79–81.

    КАС Google ученый

  • Абхилаш К.П., Рошайн М.К., Вандана К., Варгезе Г.М. Вероятный случай приобретенного токсоплазмоза, проявляющийся лихорадкой неизвестного происхождения у иммунокомпетентного человека. Int J Infect Dis. 2013;17:e1067–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Эза Д.Э., Лукас С.Б.Фульминантный токсоплазмоз, вызывающий фатальный пневмонит и миокардит. ВИЧ мед. 2006; 7: 415–20.

    КАС пабмед Google ученый

  • Саадатния Г., Голкар М. Обзор токсоплазмоза человека. Scand J Infect Dis. 2012;44:805–14.

    ПабМед Google ученый

  • Hermanns B, Brunn A, Schwarz ER, Sachweh JS, Seipelt I, Schroder JM, et al. Фульминантный токсоплазмоз у реципиента трансплантата сердца.Патол Res Pract. 2001; 197: 211–5.

    КАС пабмед Google ученый

  • Георгиев В.С. Лечение токсоплазмоза. Наркотики. 1994; 48: 179–88.

    КАС пабмед Google ученый

  • Montoya JG, Liesenfeld O. Токсоплазмоз. Ланцет. 2004; 363: 1965–76.

    КАС пабмед Google ученый

  • Хоу Д.К., Сибли Л.Д. Toxoplasma gondii включает три клональные линии: корреляция генотипа паразита с заболеванием человека. J заразить дис. 1995; 172:1561–6.

    КАС пабмед Google ученый

  • Shwab EK, Zhu XQ, Majumdar D, Pena HF, Gennari SM, Dubey JP, et al. Географические закономерности генетического разнообразия Toxoplasma gondii , выявленные с помощью мультилокусного генотипирования ПЦР-ПДРФ. Паразитология. 2014; 141:453–61.

    ПабМед Google ученый

  • Су К., Шваб Э.К., Чжоу П., Чжу XQ, Дубей Дж.П.Переход к комплексному подходу к молекулярному обнаружению и идентификации Toxoplasma gondii . Паразитология. 2010; 137:1–11.

    КАС пабмед Google ученый

  • Bossi P, Bricaire F. Тяжелый острый диссеминированный токсоплазмоз. Ланцет. 2004; 364:579.

    ПабМед Google ученый

  • Григг М.Е., Ганатра Дж., Бутройд Дж.К., Марголис Т.П. Необычное обилие атипичных штаммов, связанных с глазным токсоплазмозом человека.J заразить дис. 2001; 184: 633–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Сибли Л.Д., Бутройд Дж.К. Вирулентные штаммы Toxoplasma gondii составляют одну клональную линию. Природа. 1992; 359:82–5.

    КАС пабмед Google ученый

  • Boothroyd JC, Grigg ME. Популяционная биология Toxoplasma gondii и ее значение для заражения человека: вызывают ли разные штаммы разные заболевания? Curr Opin Microbiol.2002; 5: 438–42.

    ПабМед Google ученый

  • Котреша Д., Ноордин Р. Рекомбинантные белки в диагностике токсоплазмоза. АПМИС. 2010; 118: 529–42.

    КАС пабмед Google ученый

  • Bastien P. Молекулярная диагностика токсоплазмоза. T Roy Soc Trop Med Hyg. 2002; 96:S205–15.

    Google ученый

  • Свитай К., Мастер А., Скшипчак М., Заборовский П.Последние тенденции в молекулярной диагностике инфекций Toxoplasma gondii . Клин Микробиол Инфект. 2005; 11: 170–176.

    КАС пабмед Google ученый

  • да Силва П.С., Шираиши К.С., Силва А.В., Гонсалвес Г.Ф., Сант’Ана Дде М., Араужо Э.Дж. Toxoplasma gondii : морфометрический анализ клеток стенки и эпителия кишечника свиней. Опыт Паразитол. 2010;125:380–3.

    ПабМед Google ученый

  • Гордон С.М., Гал А.А., Герцлер Г.Л., Брайан Дж.А., Перлино С., Кантер К.Р.Диагностика легочного токсоплазмоза с помощью бронхоальвеолярного лаважа у реципиентов трансплантата сердца. Диагностика Цитопатол. 1993; 9: 650–4.

    КАС пабмед Google ученый

  • Дубей Дж. П., Карпентер Дж. Л. Гистологически подтвержденный клинический токсоплазмоз у кошек: 100 случаев (1952–1990 гг.). J Am Vet Med Assoc. 1993; 203:1556–66.

    КАС пабмед Google ученый

  • Hutchison WM, Pittilo RM, Ball SJ, Siim JC. Toxoplasma gondii : исследования тонкого кишечника инфицированных и неинфицированных кошек с помощью сканирующего электронного микроскопа. Acta Pathol Microbiol Scand B. 1979;87:393–5.

    КАС пабмед Google ученый

  • Симс Т.А., Хэй Дж., Талбот И.С. Электронно-микроскопическое и иммуногистохимическое исследование внутриклеточной локализации тканевых кист Toxoplasma в головном мозге мышей с врожденным токсоплазмозом. Британский J Exp Pathol.1989; 70: 317–25.

    КАС Google ученый

  • Дубей Дж.П., Даррингтон С., Тиао Н., Феррейра Л.Р., Чоудхари С., Молла Б. и др. Выделение жизнеспособной Toxoplasma gondii из тканей и фекалий кошек из Аддис-Абебы, Эфиопия. J Паразитол. 2013; 99:56–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Дубей Дж. П., Грэм Д. Х., Де Янг Р. В., Даль Э., Эберхард М. Л., Нэйс Э. К. и др.Молекулярные и биологические характеристики изолятов Toxoplasma gondii из диких животных в США. J Паразитол. 2004; 90:67–71.

    КАС пабмед Google ученый

  • Сабин А.Б., Фельдман Х.А. Красители как микрохимические индикаторы нового феномена иммунитета, поражающего простейшего паразита ( Toxoplasma ). Наука. 1948; 108: 660–3.

    КАС пабмед Google ученый

  • Reiter-Owona I, Petersen E, Joynson D, Aspock H, Darde ML, Disko R, et al.Прошлая и настоящая роль теста с красителем Сэбина-Фельдмана в серодиагностике токсоплазмоза. Всемирный орган здравоохранения Быка. 1999; 77: 929–35.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Дюби Дж.П., Десмонтс Г., Макдональд С., Уоллс К.В. Серологическая оценка крупного рогатого скота, зараженного Toxoplasma gondii : сравнение теста с красителем Сэбина-Фельдмана и других тестов агглютинации. Am J Vet Res. 1985; 46: 1085–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Дубей Дж. П., Рафф М. Д., Камарго М. Е., Шен С. К., Уилкинс Г. Л., Квок О. С. и др.Серологические и паразитологические реакции домашних кур после оральной инокуляции ооцистами Toxoplasma gondii . Am J Vet Res. 1993; 54: 1668–72.

    КАС пабмед Google ученый

  • Эшберн Д., Чаттертон Дж.М., Эванс Р., Джосс А.В., Хо-Йен Д.О. Успех в тесте красителя токсоплазмы. Дж Инфекция. 2001; 42:16–9.

    КАС Google ученый

  • Удонсом Р., Буддхиронгават Р., Суктана Ю.Является ли тест с красителем Сэбина-Фельдмана с использованием тахизоитов T. gondii из инокуляций животных по-прежнему лучшим методом для обнаружения антител Toxoplasma gondii . Общественное здравоохранение J Trop Med из Юго-Восточной Азии. 2010;41:1059–64.

    ПабМед Google ученый

  • Десмонтс Г., Ремингтон Дж.С. Реакция прямой агглютинации для диагностики инфекции Toxoplasma : метод повышения чувствительности и специфичности. Дж. Клин Микробиол. 1980; 11: 562–8.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Фултон Д.Д., Терк Д.Л. Реакция прямой агглютинации на Toxoplasma gondii . Ланцет. 1959; 2: 1068–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Macri G, Sala M, Linder AM, Pettirossi N, Scarpulla M. Сравнение непрямого флуоресцентного теста на антитела и модифицированного теста агглютинации для выявления Toxoplasma gondii антител к иммуноглобулину G у собак и кошек.Паразитол рез. 2009; 105:35–40.

    ПабМед Google ученый

  • Zhu C, Cui L, Zhang L. Сравнение коммерческого ИФА с модифицированным тестом агглютинации для обнаружения антител Toxoplasma gondii в сыворотке естественно инфицированных собак и кошек. Иран J Параситол. 2012;7:89–95.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Монтойя Дж.Г., Берри А., Россо Ф., Ремингтон Дж.С.Дифференциальная реакция агглютинации как метод диагностики токсоплазматического лимфаденита. Дж. Клин Микробиол. 2007;45(5):1463–8.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Виллена И., Дюран Б., Обер Д., Блага Р., Гирс Р., Томас М. и др. Новая стратегия обследования Toxoplasma gondii в мясе для потребления человеком. Вет Паразитол. 2012;183:203–8.

    ПабМед Google ученый

  • Мазумдер П., Чуанг Х.И., Венц М.В., Видбраук Д.Л.Реакция латексной агглютинации для выявления антител к Toxoplasma gondii . Дж. Клин Микробиол. 1988; 26: 2444–6.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Онсел Т., Вурал Г., Бабур С., Килич С. Выявление серопозитивности к токсоплазмозу гондии у овец в Ялове с помощью реакции Сабина-Фельдмана с красителем и реакции латексной агглютинации. Турция Parazitol Derg. 2005; 29:10–2.

    ПабМед Google ученый

  • Холлиман Р.Е., Баркер К.Ф., Джонсон Д.Д.Селективный антенатальный скрининг на токсоплазмоз и реакцию латекс-агглютинации. Эпидемиол инфекции. 1990; 105: 409–14.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Sato K, Ise Y, Iida T, Suzuki T, Shimada K, Nishioka K. Обнаружение антител IgM к токсоплазме с помощью реакции пассивной латексной агглютинации. Дж Иммунол Методы. 1987; 101: 183–91.

    КАС пабмед Google ученый

  • Камбьясо CL, Галанти LM, Леото П, Массон PL.Анализ латексной агглютинации антител человеческого иммуноглобулина М против токсоплазмы, в котором используются ферментативно обработанные частицы, покрытые антигеном. Дж. Клин Микробиол. 1992;30:882–88.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Дубей JP. Токсоплазмоз животных и человека, том. 313. Бока-Ратон: CRC Press; 2010.

    Google ученый

  • Эйсса М.Х., Абдель Салам А.М., Антониус С.Н., Абдель Гафар А.Р., Морси Т.А.Сравнительное исследование реакции с красителем Сэбина-Фельдмана и реакции непрямой гемагглютинации в серодиагностике токсоплазмоза. J Египет Soc Паразитол. 1990; 20: 729–35.

    КАС пабмед Google ученый

  • Бальфур А.Х., Бриджес Дж.Б., Харфорд Дж.П. Оценка теста ToxHA для обнаружения антител к Toxoplasma gondii в сыворотке крови человека. Джей Клин Патол. 1980; 33: 644–7.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Каруана Л.Б.Изучение вариабельности реакции непрямой гемагглютинации на антитела к токсоплазмозу. Am J Med Technol. 1980; 46: 386–91.

    КАС пабмед Google ученый

  • Ямамото Ю.И., Хосино-Симидзу С., Камарго М.Э. Новый тест непрямой гемагглютинации IgM для серодиагностики острого токсоплазмоза. Джей Клин Лаб Анал. 1991; 5: 127–32.

    КАС пабмед Google ученый

  • Артур М.Дж., Блюетт Д.А.Обнаружение IFAT IgG, специфичных к токсоплазме, в грудных жидкостях абортированных ягнят: оценка рутинных диагностических представлений. Ветеринар Рек. 1988; 122: 29–31.

    КАС пабмед Google ученый

  • Суцилатангам Г., Паланиаппан Н., Срикумар С., Анна Т. IgG – метод непрямых флуоресцентных антител для выявления серопревалентности Toxoplasma gondii у иммунокомпетентных и иммунодефицитных пациентов в южных районах штата Тамил Наду.Индийская J Med Microbiol. 2010;28:354–357.

    КАС пабмед Google ученый

  • Родригес И.М., Кастро А.М., Гомес М.Б., Амарал В.Н., Авелино М.М. Врожденный токсоплазмоз: оценка серологических методов выявления анти- Toxoplasma gondii антител IgM и IgA. Мем Инст Освальдо Круз. 2009; 104: 434–40.

    КАС пабмед Google ученый

  • Миллер М.А., Гарднер И.А., Пэкхем А., Мазет Дж.К., Ханни К.Д., Джессап Д. и др.Оценка непрямого флуоресцентного теста на антитела (IFAT) для выявления антител к Toxoplasma gondii у морской выдры ( Enhydra lutris ). J Паразитол. 2002; 88: 594–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • душ Сантуш Т.Р., Нуньес К.М., Лувизотто М.К., де Моура А.Б., Лопес В.Д., да Коста А.Дж. и др. Обнаружение ооцист Toxoplasma gondii в пробах окружающей среды из государственных школ. Вет Паразитол.2010;171:53–7.

    ПабМед Google ученый

  • Шаапан Р.М., Эль-Навави Ф.А., Тауфик М.А. Чувствительность и специфичность различных серологических тестов для выявления инфекции Toxoplasma gondii у естественно инфицированных овец. Вет Паразитол. 2008; 153:359–62.

    КАС пабмед Google ученый

  • Филиче Г., Мерони В., Карневале Г., Оллиаро П., Карози Г.Сравнение ИФА и непрямой иммунофлюоресценции при выявлении антител IgG и IgM к токсоплазме. Болл Ист Серотер Милан. 1983; 62: 445–50.

    КАС пабмед Google ученый

  • Tomasi JP, Schlit AF, Stadtsbaeder S. Быстрый двухсэндвичный твердофазный иммуноферментный анализ для обнаружения человеческого иммуноглобулина M против антител Toxoplasma gondii . Дж. Клин Микробиол. 1986; 24: 849–50.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Обваллер А., Хассл А., Пичер О., Аспок Х.Иммуноферментный анализ с целыми трофозоитами Toxoplasma gondii из бессывороточной культуры тканей для выявления специфических антител. Паразитол рез. 1995; 81: 361–4.

    КАС пабмед Google ученый

  • Лау Ю.Л., Фонг М.И., Идрис М.М., Чинг XT. Клонирование и экспрессия Toxoplasma gondii гена антигена плотных гранул 2 (GRA2) с помощью Pichia pastoris. Общественное здравоохранение J Trop Med из Юго-Восточной Азии.2012;43:10–6.

    КАС пабмед Google ученый

  • Тирувенгадам Г., Инит И., Фонг М.Ю., Лау Ю.Л. Оптимизация экспрессии поверхностного антигена SAG1/2 Toxoplasma gondii в дрожжах Pichia pastoris . Троп Биомед. 2011; 28: 506–13.

    КАС пабмед Google ученый

  • Чанг П.Ю., Фонг М.Ю., Ниссапаторн В., Лау Ю.Л. Оценка Pichia pastoris экспрессированного рекомбинантного белка роптри 2 из Toxoplasma gondii для его применения в диагностике токсоплазмоза.Am J Trop Med Hyg. 2011;85:485–9.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Wang Z, Ge W, Li J, Song M, Sun H, Wei F и др. Получение и оценка рекомбинантного гранулированного антигенного белка GRA7 для серодиагностики инфекции Toxoplasma gondii у крупного рогатого скота. Патог пищевого происхождения Dis. 2014; 11: 734–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Wang Z, Ge W, Huang SY, Li J, Zhu XQ, Liu Q.Оценка рекомбинантных гранулярных антигенов GRA1 и GRA7 для серодиагностики инфекции Toxoplasma gondii у собак. BMC Vet Res. 2014;10:158.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Li S, Galvan G, Araujo FG, Suzuki Y, Remington JS, Parmley S. Серодиагностика недавно приобретенной инфекции Toxoplasma gondii с использованием твердофазного иммуноферментного анализа с комбинацией рекомбинантных антигенов.Clin Diagn Lab Immun. 2000;7(5):781–7.

    КАС Google ученый

  • Aubert D, Maine GT, Villena I, Hunt JC, Howard L, Sheu M, et al. Рекомбинантные антигены для выявления Toxoplasma gondii -специфических иммуноглобулинов G и иммуноглобулинов M в сыворотке человека методом иммуноферментного анализа. Дж. Клин Микробиол. 2000;38:1144–50.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Пфреппер К.И., Эндерс Г., Голь М., Крчал Д., Хлобил Х., Вассенберг Д. и другие.Серореактивность и авидность к рекомбинантным антигенам при токсоплазмозе. Clin Diagn Lab Immun. 2005; 12: 977–82.

    КАС Google ученый

  • Hill D, Coss C, Dubey JP, Wroblewski K, Sautter M, Hosten T, et al. Идентификация спорозоит-специфического антигена из Toxoplasma gondii . J Паразитол. 2011;97:328–37.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Suzuki Y, Ramirez R, Press C, Li S, Parmley S, Thulliez P, et al.Выявление антител иммуноглобулина М к антигену Р35 Toxoplasma gondii для серодиагностики недавно перенесенной инфекции у беременных. Дж. Клин Микробиол. 2000;38:3967–70.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Лу Б., Ву С., Ши Ю., Чжан Р., Цзоу Л., Гао С. и др. Toxoplasma gondii : характер экспрессии и обнаружение инфекции с использованием полноразмерного рекомбинантного антигена Р35. Опыт Паразитол.2006; 113:83–90.

    КАС пабмед Google ученый

  • Дауту Г., Уэно А., Миранда А., Мваньюмба С., Муньяка Б., Кармен Г. и др. Toxoplasma gondii : обнаружение антигена MIC10 в сыворотке экспериментально инфицированных мышей. Опыт Паразитол. 2008; 118: 362–71.

    КАС пабмед Google ученый

  • Паппас М.Г., Лунде М.Н., Хайковски Р., МакМэхон Дж. Определение антител IgM и IgG к Toxoplasma с использованием процедур ИФА, ИФА и Дот-ИФА.Вет Паразитол. 1986; 20:31–42.

    КАС пабмед Google ученый

  • Jafar Pour Azami S, Keshavarz H, Rezaian M, Mohebali M, Shojaee S. Быстрое обнаружение антигена Toxoplasma gondii у экспериментально инфицированных мышей с помощью Dot-ELISA. Иран J Параситол. 2011; 6: 28–33.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Юссеф М.М., Эль-Ганайни Г.А., Эль-Шазли А.М.Эффективность IHAT, IFAT и Dot-ELISA в серодиагностике токсоплазмоза при осложненной беременности. J Египет Soc Паразитол. 1992; 22: 343–7.

    КАС пабмед Google ученый

  • Десмонтс Г., Наот Ю., Ремингтон Дж.С. Иммуноглобулин М-иммуносорбентная реакция агглютинации для диагностики инфекционных заболеваний: диагностика острых врожденных и приобретенных инфекций Toxoplasma . Дж. Клин Микробиол. 1981; 14: 486–91.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Ремингтон Дж.С., Эймстад В.М., Араужо Ф.Г.Обнаружение антител к иммуноглобулину М с частицами латекса, меченными антигеном, в иммуносорбентном анализе. Дж. Клин Микробиол. 1983; 17: 939–41.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Тобани С., Аттри С., Бойд Р., Кумарсвами Н., Ноубл Дж., Шимански М. и др. Биоконъюгация и характеристика белков, меченных коллоидным золотом. Дж Иммунол Методы. 2010; 356: 60–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Гони П., Мартин Б., Виллакампа М., Гарсия А., Серал С., Кастильо Ф.Дж. и др.Оценка иммунохроматографического теста с полосками для одновременного обнаружения антигенов Cryptosporidium spp, Giardia duodenalis и Entamoeba histolytica в образцах фекалий человека. Eur J Clin Microbiol. 2012;31:2077–82.

    КАС Google ученый

  • Wang YH, Li XR, Wang GX, Yin H, Cai XP, Fu BQ и др. Разработка иммунохроматографической полоски для быстрого обнаружения циркулирующих антигенов Toxoplasma gondii .Паразитол Интерн. 2011;60:105–7.

    КАС пабмед Google ученый

  • Хуан С., Сюань С., Хирата Х., Йокояма Н., Сюй Л., Судзуки Н. и др. Экспресс-иммунохроматографический тест с использованием рекомбинантного SAG2 для выявления антител против Toxoplasma gondii у кошек. Дж. Клин Микробиол. 2004;42:351–3.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Теркави М.А., Камеяма К., Расул Н.Х., Суан Х., Нисикава Ю.Разработка иммунохроматографического анализа на основе белка плотных гранул 7 для серологического выявления инфекции Toxoplasma gondii . Клин Вак Иммунол. 2013;20:596–601.

    КАС Google ученый

  • Сулейман А.А., Гильбо Г.Г. Последние разработки пьезоэлектрических иммуносенсоров: обзор. Аналитик. 1994; 119:2279–82.

    КАС пабмед Google ученый

  • Кабрал-Миранда Г., де Хесус Дж. Р., Оливейра П. Р., Бритто Г. С., Понтес-де-Карвальо Л. С., Дутра РФ и др.Обнаружение антигенов паразита в инфицированной Leishmania infantum ткани селезенки с помощью иммуносенсоров на основе моноклональных антител, пьезоэлектрических. J Паразитол. 2014; 100:73–78.

    КАС пабмед Google ученый

  • Ван С., Инь Т., Цзэн С., Че Х., Ян Ф., Чен Х и др. Пьезоэлектрический иммуносенсор с использованием гибридных самособирающихся монослоев для обнаружения Schistosoma japonicum . ПЛОС Один. 2012;7:e30779.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Сюй С, Мутарасан Р.Быстрое и чувствительное обнаружение Giardia lamblia с помощью пьезоэлектрического консольного биосенсора в готовой и исходной воде. Технологии экологических наук. 2010;44:1736–41.

    КАС пабмед Google ученый

  • Wang H, Lei C, Li J, Wu Z, Shen G, Yu R. Анализ пьезоэлектрической иммуноагглютинации на антитела Toxoplasma gondii с использованием наночастиц золота. Биосенс ​​Биоэлектрон. 2004; 19: 701–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Строле А., Шмид К., Хайнцер И., Нагулесваран А., Хемфилл А.Проведение вестерн-иммуноблотинга для обнаружения специфических антител IgG против Toxoplasma gondii в слюне человека. J Паразитол. 2005;91:561–3.

    КАС пабмед Google ученый

  • Villard O, Filisetti D, Roch-Deries F, Garweg J, Flament J, Candolfi E. Сравнение иммуноферментного анализа, иммуноблоттинга и ПЦР для диагностики токсоплазматического хориоретинита. Дж. Клин Микробиол. 2003;41:3537–41.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Робер-Гангне Ф., Коммерс В., Турт-Шефер С., Дюпуи-Каме Ж.Проведение вестерн-блоттинга для сравнения антител матери и новорожденного против токсоплазмы для ранней неонатальной диагностики врожденного токсоплазмоза. Eur J Clin Microbiol. 1999; 18: 648–54.

    КАС Google ученый

  • Бобич Б., Сибалич Д., Джуркович-Дьякович О. Высокий уровень антител IgM, специфичных к Toxoplasma gondii , при беременности через 12 лет после первичной инфекции Toxoplasma . История болезни.Gynecol Obstet Investig. 1991;31(3):182–4.

    КАС Google ученый

  • Горгиевски-Хрисохо М., Германн Д., Маттер Л. Диагностическое значение кинетики ответов антител иммуноглобулинов М и А на Toxoplasma gondii . Дж. Клин Микробиол. 1996; 34: 1506–11.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Мик Б., Диперслоот Р.Дж., ван Гул Т., Спейер Д., Пик Р.Распознавание IgM рекомбинантных антигенов Toxoplasma gondii сывороткой остро или латентно инфицированных людей. Диагностика Microbiol Infect Dis. 2003; 45:45–52.

    КАС пабмед Google ученый

  • Гутьеррес Х., Родригес М., Пьедрола Г., дель Кармен М.М. Обнаружение IgA и IgG с низкой авидностью для диагностики недавнего активного токсоплазмоза. Клин Микробиол Инфект. 1997; 3: 658–62.

    ПабМед Google ученый

  • Хедман К., Лаппалайнен М., Сеппая И., Макела О.На недавнюю первичную инфекцию Toxoplasma указывает низкая авидность специфических IgG. J заразить дис. 1989; 159: 736–40.

    КАС пабмед Google ученый

  • de Ory F, Casas I, Domingo CJ, Echevarria J. Применение флюороиммуноанализа для идентификации специфических IgG с низкой авидностью против патогенных вирусов человека и Toxoplasma gondii . Клин Диагн Вирол. 1995; 3: 323–32.

    ПабМед Google ученый

  • Эшберн Д., Джосс А.В., Пеннингтон Т.Х., Хо-Йен Д.О.Имеют ли тесты на авидность IgA, IgE и IgG какую-либо ценность в диагностике инфекции Toxoplasma во время беременности? Джей Клин Патол. 1998; 51: 312–5.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Али-Хейдари С., Кешаварз Х., Шоджаи С., Мохебали М. Диагностика антигенных маркеров острого токсоплазмоза с помощью иммуноблоттинга авидности IgG. Паразит. 2013;20:18.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Дешпанде П.С., Котреша Д., Ноордин Р., Юнус М.Х., Саадатния Г., Голкар М. и др.Авидность IgG Вестерн-блот с использованием Toxoplasma gondii rGRA-7, клонированного из нуклеотидов 39–711, для серодиагностики острого токсоплазмоза. Rev Inst Med Trop Сан-Паулу. 2013;55:79–83.

    ПабМед Google ученый

  • Росси КЛ. Простой экспресс-иммуноферментный анализ для оценки авидности антител к иммуноглобину G при токсоплазмозе. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1998; 30:25–30.

    КАС пабмед Google ученый

  • Козон Г.Дж., Феррандис Дж., Небхи Х., Валлон М., Пейрон Ф.Оценка авидности иммуноглобулина G для рутинной диагностики хронической инфекции Toxoplasma gondii у беременных. Eur J Clin Microbiol. 1998; 17:32–6.

    КАС Google ученый

  • Буффолано В., Лаппалайнен М., Хедман Л., Чиччимарра Ф., Дель Пеццо М., Рескальдани Р. и др. Задержка созревания авидности IgG при врожденном токсоплазмозе. Eur J Clin Microbiol. 2004; 23:825–30.

    КАС Google ученый

  • Мерони В., Дженко Ф., Тинелли С., Ланзарини П., Боллани Л., Стронати М. и др.Лечение спирамицином инфекции Toxoplasma gondii у беременных женщин нарушает выработку и созревание авидности T. gondii -специфических антител иммуноглобулина G. Клин Вак Иммунол. 2009;16:1517–20.

    КАС Google ученый

  • Лефевр-Петтаццони М., Биссери А., Валлон М., Козон Г., Пейрон Ф., Рабийоуд М. Влияние лечения спирамицином и гестационного возраста на созревание Toxoplasma gondii авидности иммуноглобулина G у беременных женщин.Клин Вак Иммунол. 2007; 14: 239–43.

    КАС Google ученый

  • Лефевр-Петтаццони М., Ле Кам С., Валлон М., Пейрон Ф. Задержка созревания авидности иммуноглобулина G: значение для диагностики токсоплазмоза у беременных. Eur J Clin Microbiol. 2006;25(11):687–93.

    КАС Google ученый

  • Bonyadi MR, Bastani P. Модификация и оценка теста на авидность IgG для дифференциации инфекции Toxoplasma gondii на ранней стадии беременности.Cell J. 2013; 15: 238–43.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Виркола К., Лаппалайнен М., Валанн Л., Коскиниеми М. Рентгенологические признаки у новорожденных, подвергшихся первичному заражению Toxoplasma внутриутробно. Педиатр Радиол. 1997; 27: 133–138.

    КАС пабмед Google ученый

  • Blaakaer J. Ультразвуковая диагностика асцита плода и токсоплазмоза.Acta Obst Gyn Scan. 1986; 65: 653–4.

    КАС Google ученый

  • Вутова К., Пейчева З., Попова А., Маркова В., Минчева Н., Тодоров Т. Врожденный токсоплазмоз: глазные проявления у новорожденных и детей. Энн Троп Педиатр. 2002; 22: 213–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Портер С.Б., Санде М.А. Токсоплазмоз центральной нервной системы при синдроме приобретенного иммунодефицита.New Engl J Med. 1992; 327:1643–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Аленгат Дж. П., Моррис Дж. Х., Кидо Д. К., Рамбо К. Л. Компьютерная томография при оппортунистическом церебральном токсоплазмозе: отчет о двух случаях. Компьютер Томогр. 1981; 5: 231–7.

    КАС пабмед Google ученый

  • Коллинз А.Т., Кромвель Л.Д. Компьютерная томография в оценке врожденного церебрального токсоплазмоза.J Comput Assist Томо. 1980;4(3):326–9.

    КАС Google ученый

  • Foulon W, Naessens A, Mahler T, de Waele M, de Catte L, de Meuter F. Пренатальная диагностика врожденного токсоплазмоза. Акушерство Гинекол. 1990; 76: 769–72.

    КАС пабмед Google ученый

  • Abboud P, Harika G, Saniez D, Gabriel R, Bednarczyk L, Chemla C, et al. Ультразвуковые признаки токсоплазмоза плода.Обзор литературы. J Gynecol Obstet Biol Reprod. 1995; 24:733–8.

    КАС Google ученый

  • Сайки Р.К., Гельфанд Д.Х., Стоффель С., Шарф С.Дж., Хигучи Р., Хорн Г.Т. и др. Праймер-направленная ферментативная амплификация ДНК с помощью термостабильной ДНК-полимеразы. Наука. 1988; 239: 487–91.

    КАС пабмед Google ученый

  • Burg JL, Grover CM, Pouletty P, Boothroyd JC.Прямое и чувствительное обнаружение патогенных простейших Toxoplasma gondii методом полимеразной цепной реакции. Дж. Клин Микробиол. 1989; 27: 1787–92.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Халифа К.С., Рот А., Рот Б., Арастех К.Н., Яничке К. Значение ПЦР для оценки возникновения паразитемии у пациентов с ослабленным иммунитетом с церебральным и экстрацеребральным токсоплазмозом. Дж. Клин Микробиол. 1994; 32:2813–9.

    Google ученый

  • Hohlfeld P, Daffos F, Costa JM, Thulliez P, Forestier F, Vidaud M. Пренатальная диагностика врожденного токсоплазмоза с помощью теста полимеразной цепной реакции на амниотической жидкости. New Engl J Med. 1994; 331: 695–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Пармли С.Ф., Гобель Ф.Д., Ремингтон Дж.С. Обнаружение Toxoplasma gondii в спинномозговой жидкости больных СПИДом методом полимеразной цепной реакции.Дж. Клин Микробиол. 1992; 30:3000–2.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Хо-Йен Д.О., Джосс А.В., Бальфур А.Х., Смит Э.Т., Бэрд Д., Чаттертон Дж.М. Использование полимеразной цепной реакции для обнаружения Toxoplasma gondii в образцах крови человека. Джей Клин Патол. 1992;45:910–3.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Lamoril J, Molina JM, de Gouvello A, Garin YJ, Deybach JC, Modai J, et al.Обнаружение методом ПЦР Toxoplasma gondii в крови при диагностике церебрального токсоплазмоза у больных СПИДом. Джей Клин Патол. 1996; 49: 89–92.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Homan WL, Vercammen M, De Braekeleer J, Verschueren H. Идентификация 200-300-кратно повторяющегося фрагмента ДНК длиной 529 п.н. в Toxoplasma gondii и его использование для диагностической и количественной ПЦР. Int J Паразитол.2000; 30: 69–75.

    КАС пабмед Google ученый

  • Райшль Ю., Бретань С., Крюгер Д., Эрно П., Коста Дж. М. Сравнение двух ДНК-мишеней для диагностики токсоплазмоза с помощью ПЦР в реальном времени с использованием гибридизационных зондов с переносом энергии флуоресцентного резонанса. BMC Infect Dis. 2003;3:7.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Уртадо А., Адурис Г., Морено Б., Барандика Дж., Гарсия-Перес А.Л.Гнездовая ПЦР в одной пробирке для обнаружения Toxoplasma gondii в тканях плода естественно абортированных овец. Вет Паразитол. 2001; 102:17–27.

    КАС пабмед Google ученый

  • Хауреги Л.Х., Хиггинс Дж., Зарленга Д., Дубей Дж.П., Ланни Дж.К. Разработка ПЦР в реальном времени для обнаружения Toxoplasma gondii в тканях свиней и мышей. Дж. Клин Микробиол. 2001; 39: 2065–71.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Кальдераро А., Пикколо Г., Горрини С., Перуцци С., Зербини Л., Боммедзадри С. и др.Сравнение двух ПЦР в реальном времени и вложенной ПЦР для обнаружения Toxoplasma gondii . Акта Биомед. 2006; 77: 75–80.

    КАС пабмед Google ученый

  • Fallahi S, Kazemi B, SJ S t, Bandehpour M, Lasjerdi Z, Tagipour N, et al. Сравнение генов RE и B1 для выявления инфекции Toxoplasma gondii у детей с онкологическими заболеваниями. Паразитол Интерн. 2014; 63:37–41.

    КАС пабмед Google ученый

  • Джонс К.Д., Охрави Н., Адамсон П., Таскер С., Лайтман С.Сравнение методов обнаружения с помощью ПЦР генов рДНК B1, P30 и 18S T. gondii в водянистой влаге. Инвестируйте в науку. 2000;41:634–44.

    КАС Google ученый

  • Эмрих Т., Карл Г. Нерадиоактивное определение активности теломеразы с использованием протокола амплификации теломерных повторов на основе ПЦР-ИФА. Методы Мол Биол. 2002; 191:147–58.

    КАС пабмед Google ученый

  • Мартинес Э., Кармело Э., Алонсо Р., Ортега А., Пинеро Дж., Дель Кастильо А. и др.Разработка быстрой полимеразной цепной реакции-ИФА с использованием полистироловых шариков для обнаружения ДНК Toxoplasma gondii . Lett Appl Microbiol. 2003; 36:30–4.

    КАС пабмед Google ученый

  • Kompalic-Cristo A, Frotta C, Suarez-Mutis M, Fernandes O, Britto C. Оценка ПЦР в реальном времени на основе повторяющегося гена B1 для обнаружения Toxoplasma gondii в периферической крови человека.Паразитол рез. 2007; 101: 619–25.

    ПабМед Google ученый

  • Nogui FL, Mattas S, Turcato Junior G, Lewi DS. Диагностика нейротоксоплазмоза у больных ВИЧ-1 методом ПЦР в реальном времени спинномозговой жидкости. Braz J Infect Dis. 2009; 13:18–23.

    ПабМед Google ученый

  • Дворкин Л.Л., Гиблер Т.М., Ван Гелдер Р.Н. Количественная диагностика инфекционного заднего увеита с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.Арка Офтальмол. 2002; 120:1534–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Каспер Д.С., Садеги К., Пруса А.Р., Райшер Г.Х., Кратохвилл К., Форстер-Вальдл Э. и др. Количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени для точного обнаружения Toxoplasma gondii в амниотической жидкости. Диагностика микроинфекции Dis. 2009; 63:10–5.

    КАС Google ученый

  • Menotti J, Vilela G, Romand S, Garin YJ, Ades L, Gluckman E, et al.Сравнение ПЦР-иммуноферментного анализа и ПЦР в реальном времени для диагностики необычного случая церебрального токсоплазмоза у реципиента трансплантата стволовых клеток. Дж. Клин Микробиол. 2003;41:5313–6.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Teixeira LE, Kanunfre KA, Shimokawa PT, Targa LS, Rodrigues JC, Domingues W, et al. Эффективность четырех молекулярных методов лабораторной диагностики врожденного токсоплазмоза в образцах амниотической жидкости.Rev Soc Bras Med Trol. 2013; 46: 584–8.

    Google ученый

  • Бретань С., Коста Дж.М. К диагностике на основе нуклеиновых кислот в клинической паразитологии и микологии. Клин Чим Акта. 2006; 363: 221–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Opsteegh M, Langelaar M, Sprong H, den Hartog L, De Craeye S, Bokken G, et al. Прямое обнаружение и генотипирование Toxoplasma gondii в образцах мяса с использованием магнитного захвата и ПЦР.Int J Food Microbiol. 2010; 139:193–201.

    КАС пабмед Google ученый

  • Джуранкова Дж., Бассо В., Ноймайерова Х., Балаз В., Янова Е., Сидлер Х. и др. Мозг является местом предрасположенности Toxoplasma gondii у экспериментально инокулированных свиней, что было выявлено с помощью магнитного захвата и ПЦР в реальном времени. Пищевой микробиол. 2014; 38: 167–70.

    КАС пабмед Google ученый

  • Джуранкова Дж., Опсти М., Ноймайерова Х., Коварчик К., Френкова А., Балаз В. и др.Количественное определение Toxoplasma gondii в образцах тканей экспериментально инфицированных коз методами магнитного захвата и ПЦР в реальном времени. Вет Паразитол. 2013;193:95–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Нотоми Т., Окаяма Х., Масубучи Х., Йонекава Т., Ватанабэ К., Амино Н. и др. Петлевая изотермическая амплификация ДНК. Нуклеиновые Кислоты Res. 2000;28:e63.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Ван И, Ван Г, Чжан Д, Инь Х, Ван М.Выявление острого токсоплазмоза у свиней с помощью петлевой изотермической амплификации и количественной ПЦР. Корейский J Паразитол. 2013; 51: 573–57.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Lin Z, Zhang Y, Zhang H, Zhou Y, Cao J, Zhou J. Сравнение метода изотермической амплификации, опосредованной петлей (LAMP), и метода ПЦР в реальном времени, направленного на повторяющийся элемент 529 п.н., для диагностики токсоплазмоза. Вет Паразитол. 2012; 185: 296–300.

    КАС пабмед Google ученый

  • Lau YL, Meganathan P, Sonaimuthu P, Thiruvengadam G, Nissapatorn V, Chen Y. Специфическая, чувствительная и быстрая диагностика активного токсоплазмоза методом петлевой изотермической амплификации с использованием образцов крови пациентов. Дж. Клин Микробиол. 2010;48:3698–702.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Цао Л., Ченг Р., Яо Л., Юань С., Яо С.Создание и применение петлевого метода изотермической амплификации для простого, специфичного, чувствительного и быстрого обнаружения Toxoplasma gondii . J Vet Med Sci. 2014;76:9–14.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Zhang H, Thekisoe OM, Aboge GO, Kyan H, Yamagishi J, Inoue N, et al. Toxoplasma gondii : чувствительное и быстрое обнаружение инфекции методом петлевой изотермической амплификации (LAMP).Опыт Паразитол. 2009; 122:47–50.

    КАС пабмед Google ученый

  • Hu X, Pan CW, Li YF, Wang H, Tan F. Образец мочи, используемый для обнаружения инфекции Toxoplasma gondii с помощью петлевой изотермической амплификации (LAMP). Фолиа Паразит. 2012;59:21–6.

    КАС Google ученый

  • Sotiriadou I, Karanis P. Оценка петлевой изотермической амплификации для обнаружения Toxoplasma gondii в пробах воды и сравнительные результаты с помощью полимеразной цепной реакции и иммунофлуоресцентного теста (IFT).Диагностика микроинфекций Dis. 2008; 62: 357–65.

    КАС Google ученый

  • Цюй Д., Чжоу Х., Хань Дж., Тао С., Чжэн Б., Чи Н. и др. Разработка изотермической амплификации, опосредованной петлей обратной транскрипции (RT-LAMP), в качестве диагностического инструмента Toxoplasma gondii в свинине. Вет Паразитол. 2013; 192:98–103.

    КАС пабмед Google ученый

  • Микита К., Маэда Т., Оно Т., Мияхира Ю., Асаи Т., Кавана А.Полезность спинномозговой жидкости для молекулярной диагностики токсоплазматического энцефалита. Диагностика микроинфекций Dis. 2013;75:155–9.

    КАС Google ученый

  • Крастева Д., Тубиана М., Хартати С., Кусумавати А., Дубремец Дж. Ф., Видада Дж. С. Разработка петлевой изотермической амплификации (LAMP) как диагностического инструмента токсоплазмоза. Вет Паразитол. 2009; 162: 327–31.

    КАС пабмед Google ученый

  • Галлас-Линдеманн К., Сотириаду И., Махмуди М.Р., Каранис П.Обнаружение ооцист Toxoplasma gondii в различных водных ресурсах с помощью петлевой изотермической амплификации (LAMP). Acta Trop. 2013;125:231–6.

    КАС пабмед Google ученый

  • Айзенберг Д., Коллине Ф., Мерсье А., Виньоль П., Дарде М.Л. Генотипирование изолятов Toxoplasma gondii с использованием 15 микросателлитных маркеров в одном мультиплексном ПЦР. Дж. Клин Микробиол. 2010;48:4641–5.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Li M, Mo XW, Wang L, Chen H, Luo QL, Wen HQ и др.Анализ дивергенции филогении и вирулентности изолятов Toxoplasma gondii из Китая. Векторы паразитов. 2014;7:133.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Айзенберг Д., Банулс А.Л., Тибайренц М., Дарде М.Л. Микросателлитный анализ Toxoplasma gondii показывает значительный полиморфизм, структурированный в две основные клональные группы. Int J Паразитол. 2002; 32: 27–38.

    КАС пабмед Google ученый

  • Blackston CR, Dubey JP, Dotson E, Su C, Thulliez P, Sibley D, et al.Типирование Toxoplasma gondii с высоким разрешением с использованием микросателлитных локусов. J Паразитол. 2001;87(6):1472–1475.

    КАС пабмед Google ученый

  • Цюань Д.Х., Ким Т.И., Чой И.Ю., Ли Ю.Х. Генотипирование корейского изолята Toxoplasma gondii с помощью мультилокусной ПЦР-ПДРФ и микросателлитного анализа. Корейский J Паразитол. 2008;46:105–8.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Дюметр А., Айзенберг Д., Розетт Л., Мерсье А., Дарде М.Л.Инфекция Toxoplasma gondii у овец из Верхней Вены, Франция: серопревалентность и генотипирование изолятов с помощью микросателлитного анализа. Вет Паразитол. 2006; 142: 376–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Хан А., Джордан С., Муччиоли С., Валлочи А.Л., Риццо Л.В., Белфорт мл. Р. и др. Генетическая дивергенция штаммов Toxoplasma gondii , связанных с глазным токсоплазмозом, Бразилия. Эмердж Инфекция Дис. 2006; 12: 942–9.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Khan A, Fux B, Su C, Dubey JP, Darde ML, Ajioka JW, et al. Недавний трансконтинентальный перенос Toxoplasma gondii , вызванный одной мономорфной хромосомой. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007; 104:14872–7.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Ajzenberg D, Cogne N, Paris L, Bessieres MH, Thulliez P, Filisetti D, et al.Генотип 86 изолятов Toxoplasma gondii , связанных с врожденным токсоплазмозом человека, и корреляция с клиническими данными. J заразить дис. 2002; 186: 684–9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Леманн Т., Марсет П.Л., Грэм Д.Х., Даль Э.Р., Дубей Д.П. Глобализация и структура популяции Toxoplasma gondii . Proc Natl Acad Sci U S A. 2006; 103:11423–8.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Хан А., Тейлор С., Су С., Макки А.Дж., Бойл Дж., Коул Р. и др.Составная карта генома и параметры рекомбинации, полученные из трех архетипических линий Toxoplasma gondii . Нуклеиновые Кислоты Res. 2005; 33: 2980–92.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Хан А., Су С., Герман М., Сторч Г.А., Клиффорд Д.Б., Сибли Л.Д. Генотипирование штаммов Toxoplasma gondii от пациентов с ослабленным иммунитетом выявило высокую распространенность штаммов типа I. Дж. Клин Микробиол.2005;43:5881–7.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Су С., Чжан С., Дубей Дж. П. Генотипирование Toxoplasma gondii с помощью маркеров мультилокусной ПЦР-ПДРФ: простой и высокоразрешающий метод идентификации паразитов. Int J Паразитол. 2006; 36: 841–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Ferreira IM, Vidal JE, Costa-Silva TA, Meira CS, Hiramoto RM, de Oliveira AC P, et al. Toxoplasma gondii : генотипирование штаммов бразильских больных СПИДом с церебральным токсоплазмозом с помощью маркеров мультилокусной ПЦР-ПДРФ. Опыт Паразитол. 2008; 118: 221–7.

    КАС пабмед Google ученый

  • Дубей Дж.П., Сундар Н., Дженнари С.М., Минервино А.Х., Фариас Н.А., Руас Дж.Л. и др. Биологическое и генетическое сравнение изолятов Toxoplasma gondii у цыплят на свободном выгуле из северного штата Пара и южного штата Риу-Гранди-ду-Сул, Бразилия, выявило весьма разнообразные и отличные популяции паразитов.Вет Паразитол. 2007; 143:182–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Zhou Y, Zhang H, Cao J, Gong H, Zhou J. Выделение и генотипирование Toxoplasma gondii от домашних кроликов в Китае для выявления распространенности штаммов типа III. Вет Паразитол. 2013;193:270–6.

    КАС пабмед Google ученый

  • Su C, Khan A, Zhou P, Majumdar D, Ajzenberg D, Darde ML, et al.Глобально разнообразные изоляты Toxoplasma gondii включают шесть основных клад, происходящих от небольшого числа различных предковых линий. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012;109:5844–9.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Хуан С.И., Цун В., Чжоу П., Чжоу Д.Х., Ву С.М., Сюй М.Дж. и др. Первый отчет о генотипировании изолятов Toxoplasma gondii от диких птиц в Китае. J Паразитол. 2012; 98: 681–2.

    ПабМед Google ученый

  • Zhou P, Sun XT, Yin CC, Yang JF, Yuan ZG, Yan HK и др. Генетическая характеристика изолятов Toxoplasma gondii от свиней на юго-западе Китая. J Паразитол. 2011;97:1193–5.

    ПабМед Google ученый

  • Zhou P, Zhang H, Lin RQ, Zhang DL, Song HQ, Su C и др. Генетическая характеристика изолятов Toxoplasma gondii из Китая.Паразитол Интерн. 2009;58:193–5.

    КАС пабмед Google ученый

  • Dubey JP, Zhu XQ, Sundar N, Zhang H, Kwok OC, Su C. Генетическая и биологическая характеристика изолятов Toxoplasma gondii кошек из Китая. Вет Паразитол. 2007; 145:352–6.

    КАС пабмед Google ученый

  • Гуо З.Г., Гросс У., Джонсон А.М. Маркеры вирулентности Toxoplasma gondii , идентифицированные случайной амплифицированной полиморфной ДНК-полимеразной цепной реакцией.Паразитол рез. 1997; 83: 458–63.

    КАС пабмед Google ученый

  • Гуо З.Г., Джонсон А.М. Генетическая характеристика штаммов Toxoplasma gondii методом случайной амплификации полиморфной ДНК-полимеразной цепной реакции. Паразитология. 1995; 111:127–32.

    КАС пабмед Google ученый

  • Ferreira Ade M, Vitor RW, Carneiro AC, Brandao GP, Melo MN.Генетическая изменчивость бразильских штаммов Toxoplasma gondii , обнаруженная с помощью случайной амплифицированной полиморфной ДНК-полимеразной цепной реакции (RAPD-PCR) и простой ПЦР с повторяющимися последовательностями (SSR-PCR). Заразить Генет Эвол. 2004; 4: 131–42.

    ПабМед Google ученый

  • Ариф И.А., Бакир М.А., Хан Х.А., Аль Фархан А.Х., Аль Хомайдан А.А., Бахкали А.Х. и др. Краткий обзор молекулярных методов оценки разнообразия растений. Inter J Mol Sci.2010;11(5):2079–96.

    КАС Google ученый

  • Джекс А.Р., Смит Х.В., Монис П.Т., Кэмпбелл Б.Е., Гассер Р.Б. Cryptosporidium – биотехнологические достижения в обнаружении, диагностике и анализе генетической изменчивости. Биотехнология Adv. 2008; 26: 304–17.

    КАС пабмед Google ученый

  • Costa JM, Cabaret O, Moukoury S, Bretagne S. Генотипирование простейшего патогена Toxoplasma gondii с использованием анализа плавления повторяющегося гена B1 с высоким разрешением.J Микробиологические методы. 2011; 86: 357–63.

    КАС пабмед Google ученый

  • Коста Дж.М., Аланио А., Мукури С., Клэрет В., Дебрюйн М., Поведа Дж.Д. и др. Прямое генотипирование Toxoplasma gondii из амниотической жидкости на основе полиморфизма гена B1 с использованием анализа мини-секвенирования. BMC Infect Dis. 2013;13:552.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Kong JT, Grigg ME, Uyetake L, Parmley S, Boothroyd JC.Серотипирование инфекций Toxoplasma gondii у людей с использованием синтетических пептидов. J заразить дис. 2003; 187:1484–95.

    КАС пабмед Google ученый

  • Xiao J, Buka SL, Cannon TD, Suzuki Y, Viscidi RP, Torrey EF и др. Серологическая картина соответствует инфекции Toxoplasma gondii типа I у матерей и риску развития психоза у взрослого потомства. микробы заражают. 2009; 11:1011–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Соуза С., Айзенберг Д., Марле М., Обер Д., Виллена И., да Коста Д.С. и др.Отбор полиморфных пептидов из последовательностей GRA6 и GRA7 штаммов Toxoplasma gondii для использования в серотипировании. Клин Вак Иммунол. 2009; 16:1158–69.

    КАС Google ученый

  • Sousa S, Canada N, Correia da Costa JM, Darde ML. Серотипирование естественно инфицированных Toxoplasma gondii мясных животных. Вет Паразитол. 2010; 169:24–8.

    КАС пабмед Google ученый

  • Соуза С., Айзенберг Д., Виланова М., Коста Дж., Дарде М.Л.Использование синтетических полиморфных пептидов, полученных из GRA6, в иммуноферментном анализе на серотип Toxoplasma gondii в образцах сыворотки человека, собранных на трех континентах. Клин Вак Иммунол. 2008;15:1380–6.

    КАС Google ученый

  • Пейрон Ф., Лобри Дж. Р., Мюссе К., Феррандис Дж., Гомес-Марин Дж. Э., Петерсен Э. и др. Серотипирование Toxoplasma gondii у беременных с хронической инфекцией: преобладание типа II в Европе и типов I и III в Колумбии (Южная Америка).микробы заражают. 2006; 8: 2333–40.

    КАС пабмед Google ученый

  • Максимов П., Зервек Дж., Дубей Дж. П., Панчев Н., Фрей С. Ф., Максимов А. и др. Серотипирование Toxoplasma gondii у кошек ( Felis domesticus ) выявило преобладание инфекций II типа в Германии. ПЛОС Один. 2013;8:e80213.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Максимов П., Зервек Дж., Максимов А., Хотоп А., Гросс Ю., Спеккер К. и др.Анализ реакций клональных типоспецифических антител у Toxoplasma gondii серопозитивных людей из Германии с помощью пептидного микрочипа. ПЛОС Один. 2012;7:e34212.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Турунен Х., Вуорио К.А., Лейникки П.О. Определение гуморального ответа IgG, IgM и IgA при токсоплазмозе человека методом иммуноферментного анализа (ИФА). Scand J Infect Dis. 1983; 15: 307–11.

    КАС пабмед Google ученый

  • Li S, Maine G, Suzuki Y, Araujo FG, Galvan G, Remington JS и др.Серодиагностика недавно приобретенной инфекции Toxoplasma gondii с рекомбинантным антигеном. Дж. Клин Микробиол. 2000; 38: 179–84.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Чандрамухи А. Диагностика нейротоксоплазмоза путем выявления антител в спинномозговой жидкости (ЦСЖ) с использованием реакции латекс-агглютинации и ИФА. J Коммун Дис. 2004; 36: 153–158.

    КАС пабмед Google ученый

  • Деревья А.Дж., Крозье С.Дж., Бакстон Д., Блюетт Д.А.Серодиагностика токсоплазмоза овец: оценка реакции латекс-агглютинации и значения специфических титров IgM после экспериментальных инфекций, вызванных ооцистами. рез. вет. 1989; 46: 67–72.

    КАС пабмед Google ученый

  • Риллинг В., Дитц К., Крчал Д., Кнотек Ф., Эндерс Г. Оценка коммерческого вестерн-блоттинга IgG/IgM для ранней постнатальной диагностики врожденного токсоплазмоза. Eur J Clin Microbiol. 2003; 22: 174–80.

    КАС Google ученый

  • Cresti S, Ciacci C, Donati E, Giordano I, Tordini G, Barberi A. Оценка методов ПЦР для 5S-рДНК и генов p30 для обнаружения Toxoplasma gondii в крови и других клинических образцах. Новый микробиол. 2001; 24:171–174.

    КАС пабмед Google ученый

  • Yu H, Huang B, Zhuo X, Chen X, Du A. Оценка ПЦР в реальном времени на основе одной копии гена SAG1 для обнаружения Toxoplasma gondii .Вет Паразитол. 2013;197:670–3.

    КАС пабмед Google ученый

  • Wahab T, Edvinsson B, Palm D, Lindh J. Сравнение повторяющихся элементов AF146527 и B1, двух мишеней ПЦР в реальном времени, используемых для обнаружения Toxoplasma gondii . Дж. Клин Микробиол. 2010;48:591–2.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Kong QM, Lu SH, Tong QB, Lou D, Chen R, Zheng B, et al.Петлевая изотермическая амплификация (LAMP): раннее обнаружение инфекции Toxoplasma gondii у мышей. Паразитный вектор. 2012;5:2.

    КАС Google ученый

  • Токсоплазмоз

    Токсоплазмоз — это заболевание, вызываемое одноклеточным паразитом под названием Toxoplasma gondii . У людей это может поражать множество различных органов тела. Наиболее частая находка — это легкое, похожее на грипп заболевание, которое длится несколько дней.Большинство людей выздоравливают без осложнений. Даже если пациент обратится к врачу, болезнь все равно может быть связана с гриппом, если только не будут проведены специальные анализы крови.

    Если беременная женщина заразится токсоплазмозом, возможно, что организм поразит еще не родившегося ребенка. Именно эта форма заболевания имеет самые тяжелые последствия, поскольку ребенок может пострадать на всю жизнь.

    Болезнь токсоплазмоз встречается примерно у 140 детей на миллион рождений в Соединенных Штатах. Такое же количество детей будет инфицировано этим организмом при рождении и заболеет в более позднем возрасте.Таким образом, общая заболеваемость врожденным и приобретенным токсоплазмозом в США составляет 0,028%. Хотя это действительно реальное заболевание с тяжелыми последствиями, следует отметить, что заболеваемость им очень мала, особенно если учесть, что около 1/3 населения США имеют антитела к токсоплазме , что свидетельствует о том, что они подверглись воздействию вируса. болезнь.

    Трансмиссия

    Хотя заболевание токсоплазмозом может развиться у нескольких видов, включая людей и собак, организм может завершить свой жизненный цикл только у домашней кошки.Это означает, что кошка может заразиться организмом и передать его другим кошкам или другим видам, включая людей. Однако для этого должно произойти следующее:

    1. Кошка должна быть заражена организмом. Для того чтобы это произошло, кошка должна съесть что-то зараженное ею. Чаще всего он передается кошке при употреблении инфицированных мышей или зараженного сырого или недоваренного мяса, особенно свинины или баранины.
    2. Кошка, должно быть, выделяет организм с фекалиями.Это происходит только около 10 дней. Обычно это происходит только один раз в жизни кошки. (В некоторых случаях кошка может снова выделить организм; однако, если это произойдет, количество выделяемых организмов настолько мало, что передача очень маловероятна.)
    3. Микроорганизм должен «инкубировать» в фекалиях кошки в течение 1-5 дней, прежде чем он станет заразным для человека. Эта «инкубация» должна происходить после того, как фекалии покинут тело кошки и получат доступ к кислороду (то есть в лотке или в почве).
    4. Заражаемый должен проглотить микроорганизм. Он не передается человеку воздушно-капельным путем.

    Возбудитель также может передаваться человеку при употреблении в пищу сырого или недоваренного мяса, особенно свинины или баранины. Поскольку многие гамбургеры в ресторанах быстрого питания готовятся из говядины, разбавленной свининой, большинство авторитетов считают, что заражение человека происходит гораздо чаще при таком способе, чем при контакте с кошками. Заболеваемость антителами Toxoplasma у ветеринаров, группы людей, которые подвергались бы гораздо более высокому риску, если бы передача от кошек была важным фактором, ничем не отличается от заболеваемости остальной части населения.

    Проверка вашей кошки

    Если вы беременны или планируете забеременеть, вы можете проверить свою кошку на токсоплазмоз. Тест проверяет наличие антител к паразитам Toxoplasma . Если у вашей кошки отрицательный результат, это означает, что она никогда не контактировала с микроорганизмом Toxoplasma и не может заразить вас.

    Положительный результат теста на антитела означает, что в прошлом имел место контакт с микроорганизмом или , что имеется активная инфекция токсоплазмоза.Чтобы узнать, какая ситуация существует, необходимо провести второй тест через 2-4 недели. Если второй титр антител значительно выше первого, то идет активная инфекция. Если он такой же или ниже, значит, воздействие произошло когда-то в прошлом.

    В любом случае, один положительный тест на антитела к токсоплазме не означает, что вам нужно избавиться от кошки, если вы беременны . Чтобы вы могли заразиться, у кошки должна быть активная инфекция (редко) и она должна быть в 10-дневном периоде выделения фекалий, который бывает раз в жизни, чтобы заразить вас.

    Чтобы определить, действительно ли ваша кошка заразна, можно провести дополнительные тесты. Однако проще соблюдать некоторые основные меры предосторожности при обращении с кошкой и даже более важные меры предосторожности при обращении с мясом и овощами, которые являются наиболее распространенными путями заражения.

    Меры предосторожности

    Не позволяйте кошке есть мышей или плохо приготовленное мясо. Кормление коммерческим кормом для кошек и запрет на пребывание вашей кошки на открытом воздухе практически исключает любую возможность заражения кошки.

    1. Ежедневно вычищайте все фекалии из кошачьего туалета. Даже если фекалии кошки заражены токсооцистами, они должны инкубировать в течение 1-5 дней, прежде чем станут заразными. В целях безопасности не позволяйте беременной женщине чистить кошачий лоток. (Женщины мира, возрадуйтесь! Пусть муж и дети возьмут на себя эту работу, и не возвращайте ее после рождения ребенка!)
    2. При работе с почвой (клумбы), которую кошки могут использовать в качестве кошачьего туалета, надевайте перчатки, чтобы ооцисты не попали на руки.Тщательно мойте руки после работы в саду и перед едой.
    3. Избегайте употребления сырого или плохо приготовленного мяса. Будьте особенно осторожны с гамбургерами из фаст-фуда. Поскольку это, вероятно, представляет большую угрозу для вашего ребенка, чем для вашей кошки, здесь следует уделить особое внимание. Практикуйте безупречную обработку мяса и гигиену, включая частое мытье рук с антибактериальным мылом.
    4. Держите детские песочницы закрытыми. Уличные кошки часто используют песочницу для дефекации. Даже если фекалии вычерпать, песочница может остаться зараженной паразитами

    Серотипирование Toxoplasma gondii у кошек (Felis domesticus) выявило преобладание инфекций типа II в Германии

    Аннотация

    Фон

    Кошки являются окончательными хозяевами Toxoplasma gondii и играют важную роль в эпидемиологии этого паразита.Исследование направлено на выяснение того, способны ли кошки вырабатывать специфические антитела против различных клональных типов T. gondii , а также на определение путем серотипирования клональных типов T. gondii , преобладающих у кошек в качестве промежуточных хозяев в Германии.

    Методология

    Для проведения теста серотипирования с помощью пептидного микрочипа мы идентифицировали 24 подходящих пептида, используя серологические T. gondii положительные (n=21) и отрицательные кошачьи сыворотки (n=52). Для определения ответа клональных типоспецифических антител кошек в Германии использовали 86 полевых сывороток из T.gondii серопозитивных кошек, инфицированных естественным путем. Кроме того, мы проанализировали реакцию антител у кошек, экспериментально инфицированных неканоническими типами T. gondii (n=7).

    Находки

    Положительная эталонная сыворотка кошек реагировала преимущественно с пептидами, содержащими аминокислотные последовательности, специфичные для клонального типа T. gondii , которым были инфицированы кошки. Когда массив был применен к полевой сыворотке из Германии, 98,8% (85/86) естественно инфицированных кошек распознали сходные пептидные структуры, как T.gondii с эталонными сыворотками типа II и показали наибольшую интенсивность реакции с клональными специфическими пептидами типа II. Кроме того, кошки, инфицированные естественным путем, значительно чаще распознавали пептиды, специфичные для типа II, чем пептиды, специфичные для других типов. Кошки, инфицированные неканоническими типами, показали самую сильную реактивность с пептидами, представляющими аминокислотные последовательности, специфичные как для типа I, так и для типа III.

    Выводы

    Кошки способны давать клональный ответ типоспецифических антител против T.гондии . Серотипирование выявило для большинства серопозитивных полевых сывороток образцы, напоминающие наблюдаемые после заражения клональным типом II- T. gondii . Этот вывод согласуется с нашими предыдущими результатами о появлении клональных типов T. gondii в ооцистах, выделяемых кошками в Германии.

    Образец цитирования: Максимов П., Зервек Дж., Дубей Дж. П., Панчев Н., Фрей С. Ф., Максимов А. и др. (2013) Серотипирование Toxoplasma gondii у кошек ( Felis domesticus ) выявило преобладание инфекций типа II в Германии.ПЛОС ОДИН 8(11): е80213. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0080213

    Редактор: Эмма Х. Уилсон, Калифорнийский университет, Риверсайд, США

    Поступила в редакцию: 6 февраля 2013 г.; Принято: 1 октября 2013 г.; Опубликовано: 7 ноября 2013 г.

    Copyright: © 2013 Максимов и др. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания оригинального автора и источника.

    Финансирование: Исследование было поддержано Федеральным министерством образования и исследований Германии (Toxonet01 и Toxonet02) за счет средств Г. Шареса (01KI0765; 01KI1002F). Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

    Конкурирующие интересы: Никола Панчев — руководитель лаборатории серологии/паразитологии IDEXX Laboratories, Vet Med Labor GmbH. Йоханнес Цервек — руководитель лаборатории по производству слайдов с пептидными микрочипами в JPT peptide Technologies.Ульф Раймер является руководителем отдела исследований и разработок в JPT. Нет никаких патентов, продуктов в разработке или продаваемых продуктов, которые нужно декларировать. Это не меняет соблюдения авторами всех политик PLoS ONE в отношении обмена данными и материалами, как подробно описано в онлайн-руководстве для авторов.

    Введение

    Toxoplasma gondii — зоонозный облигатный внутриклеточный паразит, вызывающий токсоплазмоз у людей и животных. Кошачьи являются окончательными хозяевами этого паразита, и почти все теплокровные млекопитающие, включая людей и кошек [1,2], могут служить промежуточными хозяевами .

    В популяции T. gondii в Европе и Северной Америке преобладают три клональных типа (I, II и III), тогда как большинство охарактеризованных изолятов из Южной Америки и Африки генетически отличаются от этих канонических типов. Большинство наблюдаемых в Бразилии генотипов считаются неканоническими или «атипичными». ПЦР-ПДРФ выявил в основном комбинации специфических аллелей I и III типов [3]. Это, однако, не означает, что они представляют собой половые рекомбинанты, происходящие от канонических типов, а скорее должны рассматриваться как эволюционно отдельные линии [4-6].

    Клональный тип T. gondii считается ключевым фактором, ответственным за клинические проявления токсоплазмоза у беспородных мышей [7]. Появляется все больше свидетельств того, что это может относиться и к другим промежуточным хозяевам, включая человека [6,8,9]. Канонические и неканонические T. gondii были связаны с определенными клиническими проявлениями у людей [10-12]. Однако географическое распространение и доминирование определенных типов T. gondii , а также генетические факторы и факторы, связанные с иммунитетом хозяина, могли иметь предвзятость в предыдущих исследованиях [13-15].Для глазного токсоплазмоза, например, было продемонстрировано, что большинство случаев в Южной Америке были вызваны неканоническими T. gondii [16], тогда как во Франции было обнаружено преобладание T. gondii типа II [17,18]. ]. Однако Гилберт и соавт. (2008) [16] продемонстрировали, что у врожденно инфицированных бразильских детей вероятность развития глазного токсоплазмоза с более тяжелыми симптомами в пять раз выше, чем у врожденно инфицированных детей из Европы. Маклеод и др. (2012) наблюдали как Т.gondii серотипов, II и NE-II (т. е. не только серотип II), в случаях врожденного токсоплазмоза в Северной Америке. Однако T. gondii серотипа NE-II чаще встречался в определенных демографических группах и статистически ассоциировался с более тяжелыми случаями врожденного токсоплазмоза [9]. Эти результаты могут свидетельствовать о том, что на тяжесть течения токсоплазмоза человека может влиять генотип T. gondii , вызвавший инфекцию. Поэтому эпидемиологически важно определить Т.gondii , преобладающих в отдельных географических районах, и сравнить тип T. gondii , преобладающих в клинических случаях токсоплазмоза человека и животных [19].

    Большинство исследований по типированию T. gondii у кошек проводились с использованием ДНК-зависимых методик [20-24]. Однако большинство образцов ДНК T. gondii были получены либо из тканей/тканевых кист у умерщвленных кошек, либо из ооцист, выделенных из образцов кошачьих фекалий. Получить достаточное количество ДНК паразита из тканей и жидкостей хозяина сложно даже в случаях клинического токсоплазмоза. T. gondii ДНК из субклинических случаев, которые могут иметь первостепенное значение для эпидемиологических исследований потенциальных эффектов, связанных с типом, отсутствуют. Серотипирование позволяет включать не только клинические, но и субклинические случаи. Это объясняет, почему типирование инфекций T. gondii посредством ответа антител является привлекательным и побудило к ряду исследований в прошлом.

    Инфекция T. gondii вызывает сильный и часто стойкий гуморальный иммунный ответ с определяемыми титрами антител, независимо от клинических проявлений у инфицированного хозяина [25,26].

    Некоторые из антигенных белков T. gondii демонстрируют различия в последовательностях полипептидов, экспрессируемых разными клональными типами [10,27,28]. Конг и др. (2003) [10] показали, что гуморальный ответ против T. gondii частично типоспецифичен, когда в качестве пептидных антигенов используются сайты клональных типоспецифических полиморфизмов. На основании этих результатов было проведено несколько исследований по серотипированию T. gondii у людей с использованием полиморфных синтетических пептидов.Результаты показали, что можно различать инфекцию типа II и нетипа II [10, 27, 29-32]. Сяо и др. (2009) идентифицировали пептиды, которые также можно использовать для различения инфекций типа III и типа I [31].

    Кошки играют важную роль в эпидемиологии инфекции T. gondii , поскольку они являются окончательными хозяевами паразита. Они могут выделять большое количество экологически устойчивых ооцист, которые после споруляции представляют собой один из основных источников инфекции для промежуточных хозяев [33].Большинство из T. gondii от кошек были генетически охарактеризованы с помощью ПЦР-ПДРФ и секвенирования [34-37] после выделения с помощью биологического анализа на мышах с использованием инфицированных тканей кошки или ооцист из образцов фекалий [20,21]. Поскольку инфекция T. gondii у кошек обычно протекает бессимптомно, трудно выделить паразита или выявить выделение ооцист у здоровых кошек. Однако у инфицированных кошек обычно вырабатываются антитела против T. gondii примерно в течение 2 недель после заражения [33,38,39].Следовательно, серотипирование может быть альтернативным методом оценки распространенности типов T. gondii у кошек. Было неизвестно, возможно ли серотипирование T. gondii у кошек. Поэтому мы сначала исследовали, способны ли кошки вызывать специфический серологический ответ против канонических клональных типов T. gondii . Синтетический пептидный микрочип был создан и использован для определения серотипа T. gondii естественно инфицированных кошек в Германии.Полиморфные пептиды, идентифицированные для серотипирования кошек, также могут быть пригодны для серотипирования других видов, включая человека.

    Материалы и методы

    Заявление об этике

    Все эксперименты на кошках и мышах, проведенные в США, были одобрены Комитетом по содержанию и использованию животных Белтсвилля (BAACUC).

    Экспериментальное заражение кошек, проведенное в Иране, было проведено в соответствии с описанием Иранской организации по защите прав животных [40] и было одобрено в отношении прав животных Этическим комитетом заместителя по исследованиям и вопросам высшего образования ветеринарного факультета Университета Шахрекорд. (Нет.122.5938-9). Подробности об экспериментальных инфекциях, проведенных в Иране, и серологические результаты котят были опубликованы в другом месте [41]. Сыворотки кошек в Германии и Швейцарии собирали для рутинной ветеринарной диагностики, а не для исследования; следовательно, не требовалось этического одобрения.

    Отбор пептидных последовательностей

    Для обнаружения клональных типоспецифических антител в сыворотке из Т. было выбрано в общей сложности 101 полиморфных пептидных последовательностей T. gondii , т. е. пептидных последовательностей, которые различались по крайней мере для двух из трех канонических типов I, II и III.gondii -зараженные животные. Они включали 54 пептидные последовательности из 15 иммуногенов T. gondii , которые ранее считались клонально-типоспецифичными [10].

    Кроме того, 47 из 101 полиморфного пептида были отобраны на основе аминокислотных последовательностей T. gondii , частично опубликованных в Genbank. Они включали пептиды белков плотных гранул GRA6 (AAF60334; AAF60336; AAF60337) [27, 42], GRA5 (последовательности взяты из публикации [27]) и GRA7 (ABE69193; EU157141; DQ459455) [43, 44]. а также поверхностный антиген SAG2A (AAK50636; AAK50637; AAK50638; AAF79155) [45,46].Для идентификации полиморфных, т.е. типоспецифичных аминокислотных (аа) последовательностей, анализ белковых последовательностей и выравнивание проводили с помощью инструмента «MegAlign», предоставленного программой DNAStar (DNASTAR, Inc; Мэдисон; Висконсин; США). Полиморфные пептидные последовательности длиной 15 аминокислот, содержащие В-клеточные эпитопы, отбирали с использованием инструмента «Protean» компании DNAStar (DNAStar Inc; Мэдисон; Висконсин; США). Методы шкалы предрасположенности и пороговые значения, реализованные в этой программе, использовались для идентификации областей аа с потенциальными В-клеточными эпитопами в соответствии со следующими критериями: (i) предсказанная альфа-спиральная структура (определенная по «графикам Гарнье-Робсона» [47]), (ii) наличие остатков пролина, (iii) значительное содержание гидрофильных аминокислот (определяемое по «графикам гидропатии Кайта-Дулиттла» [48]), (iv) высокий «антигенный индекс» с использованием «графиков Джеймсона и Вольфа» [49 ] интегрирование параметров гибкости со значениями гидропатии/доступности растворителя и (v) высокой поверхностной вероятностью («графики поверхностной вероятности Эмини» [50]), основанной на значениях доступности растворителя боковой цепи отдельных аминокислот.Информация обо всех пептидных последовательностях, выбранных для этого исследования, представлена ​​в таблице S1 .

    Сыворотка для кошек

    Сыворотки кошек, инфицированных каноническим
    T. gondii .

    В целом, 17 кошачьих сывороток, специфичных для клонального типа I, 3 сыворотки, специфичных для клонального типа II, и одна сыворотка, специфичная для клонального типа III, были доступны в качестве положительных эталонных стандартов для валидации пептидов для серотипирования T. gondii у кошек. Сыворотки, полученные от кошек, инокулированных тканевыми кистами мышиных вирулентных неканонических Т.gondii изолята (n=7).

    Серологический статус эталонной сыворотки определяли в иммунофлуоресцентном тесте на антитела (IFAT) и иммуноблотинге с использованием поверхностного антигена 1 (TgSAG1) T. gondii в качестве антигена (как описано ниже).

    За исключением одной сыворотки типа II, полученной от иммунокомпетентного 10-летнего кота-самца, умершего от системного токсоплазмоза, из которого был выделен штамм T. gondii , представляющий клональный специфический аллель типа II в ПЦР-ПДРФ. (в этом исследовании обозначаемый как TgCatSw1) [51] (Таблица S2 ), все положительные эталонные стандарты получены в результате экспериментальных инфекций, как описано ниже.

    Сыворотка от кошек, зараженных per os тканевыми кистами, в Лаборатории паразитарных болезней животных, Сельскохозяйственный исследовательский центр Белтсвилля, Мэриленд, США: У всех кошек, получавших тканевые кисты, перед заражением брали кровь, и в разведении сыворотки 1:25 не было антител. проверено MAT [52]. Количество тканевых цист в инокуляте было неизвестно, так как кошек кормили целыми инфицированными тканями. Кошки были получены из кошачьей колонии, свободной от T. gondii , как описано ранее [37].На момент эксперимента им было 3-5 месяцев [39].

    Три кошки были инфицированы тканевыми кистами T. gondii типа I штамма CT1, две — штаммом GT1 и одна кошка — штаммом RH. Сыворотки у этих кошек собирали на 22, 35, 25, 29, 34 и 43 дни после заражения. Двум кошкам экспериментально инокулировали T. gondii тканевые кисты II типа изолята TgSdCo1 T. gondii и штамма ME49 [53,54]. Сыворотку от этих животных собирали на 49 и 29 день после инокуляции соответственно.Для проверки клональных пептидов, специфичных для типа III, была доступна единственная сыворотка от кошки, экспериментально инфицированной тканевыми кистами от мышей, инфицированных штаммом VEG [55]. Сыворотку собирали на 23 день после инфицирования (таблица S2 ).

    Сыворотки кошек, экспериментально инфицированных тахизоитами на ветеринарном факультете Университета Шахрекорд, Иран: Шесть 45±5-дневных клинически здоровых котят обоего пола были инфицированы внутрибрюшинно 10 4 T.gondii RH тахизоитов в стерильном PBS, как описано ранее [41]. У пяти из шести котят, инфицированных RH-тахизоитами, образцы сыворотки были собраны на 18-й и 26-й дни после заражения. От одного котенка был доступен только образец сыворотки, собранный на 26-й день после заражения (таблица S2 ).

    Сыворотки от
    кошек инфицированных неканоническими T. gondii .

    Три изолята были получены из Параны, Бразилия (TgCatBr1, 2, 5) [56] (таблица S2 ).Три кошки были экспериментально инфицированы одним из этих изолятов в Лаборатории паразитарных заболеваний животных, Белтсвилль, Центр сельскохозяйственных исследований, Мэриленд, США. Сыворотки собирали для дальнейшего анализа на 42-й и 30-й дни после инфицирования (таблица S2 ). Другие сыворотки были получены от трех кошек, инфицированных T. gondii , выделенных от дикого черного медведя с Аляски (TgBbUS1) [57], и одной сыворотки, полученной от кошки, экспериментально инфицированной T. gondii , выделенной от козы в США ( TgGoatUS6) [58].Образцы сыворотки в этой группе собирали на 37, 24, 33, 43 и 36 дни после заражения (таблица S2 ).

    Сыворотки от естественных
    T. gondii серопозитивных кошек.

    Все полевые сыворотки от кошек, использованных в этом исследовании (n=138), были собраны во время рутинного серологического тестирования на T. gondii в Vet Med Labor GmbH, подразделение IDEXX Laboratories, Людвигсбург, Германия. Пятьдесят два образца сыворотки были отрицательными на антитела T. gondii в обоих серологических тестах (IFAT и TgSAG1-иммуноблот) и использовались для проверки пептидов как части отрицательного эталонного стандарта в ROC-анализе.Восемьдесят шесть образцов были серопозитивными в обоих серологических тестах и ​​в дальнейшем использовались для определения клональных типов, естественным образом переносимых инфицированными T. gondii кошками из Германии.

    ИФАТ

    Штамм T. gondii RH (Sabin, 1941) культивировали и использовали для приготовления IFAT-препаратов, как описано ранее [58]. Тест проводили, как описано для N. caninum [59], но со следующей модификацией: анти-кошачий IgG [H+L], полученный у коз и связанный с FITC (102-095-003, ImmunoResearch Laboratories, West Grove, Пенсильвания, США), разведенный 1:50 в PBS, 0.Для обнаружения первичных антител использовали 2% Evans Blue. Обратный титр 200 использовали в качестве положительного порогового титра.

    Иммуноблот TgSAG1

    Нативный TgSAG1 подвергали аффинной очистке, как описано [58]. Идентичность очищенного белка подтверждали с использованием моноклональных антител против TgSAG1 (IgG2a P30/3 [ISL, Paignton, UK]). Детекцию антител против TgSAG1 проводили практически так же, как описано [60] с некоторыми модификациями. Вкратце, кошачьи сыворотки разводили 1:100, а конъюгат (конъюгированный с пероксидазой AffiniPure Goat anti-cat IgG [H+L], 102-035-003, Jackson ImmunoResearch, West Grove, Pennsylvania, USA) разводили 1:500.Реактивность с полосой 30 кДа расценивали как T. gondii -положительную реакцию. В качестве контроля использовали две сыворотки, полученные от IFAT-положительной и IFAT-отрицательной кошки.

    Пептидный микрочип

    Пептиды

    были синтезированы и напечатаны на предметных стеклах с пептидными микрочипами (т. е. на модифицированных предметных стеклах) компанией JPT Peptide Technologies GmbH, Берлин, Германия, по существу, как описано [30].

    образца кошачьей сыворотки были обработаны на пептидных микрочипах, как описано [61] с некоторыми модификациями.Образцы сыворотки (60 мкл/лунка), разбавленные 1:100 блокирующим раствором (PBS, 0,05% Tween 20, 0,2% I-Block [Applied Biosystems, Бедфорд, Массачусетс, США]), инкубировали при 37°C в течение 1 часа. и промывали семь раз по 3 мин PBS-T (PBS, pH 7,2; 0,5% Tween 20) при комнатной температуре. Добавляли конъюгат (биотин-SP-конъюгированный AffiniPure козы против кошачьих IgG, Fc Fragment Specific, 102-065-008, Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, Pennsylvania, USA), разведенный в блокирующем растворе 1:500 (1 мкг/мл). в лунки (60 мкл/лунка), инкубировали при 37°С в течение 30 мин и промывали, как указано выше.В лунки добавляли 5-конъюгированный стрептавидин Cy Tm (016-170-084, Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, Pennsylvania, USA), разведенный блокирующим раствором 1:500 (1 мкг/мл) (60 мкл/лунка). , инкубировали при 37 °C в течение 30 минут и промывали, как описано, с последующими тремя дополнительными этапами промывки, по 1 минуте каждый, стерильно отфильтрованной водой MilliQ. После этого микрочипы сушили центрифугированием в течение 10 с с помощью вращателя слайдов (DW-41MA-230, Qualitron Inc/Eppendorf, Берцдорф, Германия).

    Сканирование и оценка микрочипов, а также извлечение данных выполнялись, как описано [30].

    Анализ данных микрочипов

    Для анализа необработанных данных (медиана интенсивности сигнала) в файлах GPR (результаты GenePix) были восстановлены значения индекса (IV), а также средние значения IV для каждого пептида в трех повторностях на блок (среднее значение индекса образца, MSIV). как описано ранее с использованием R (версия R 2.14.1 (08.07.2011) Copyright (C) 2011; ISBN 3-1-08-9; http://CRAN.R-project.org/) [30,61 -63]. Пептидные микрочипы, использованные в этом исследовании, не соответствовали критериям, необходимым для подачи в общедоступные базы данных на основе MIAME, поскольку тип данных биомолекулярного взаимодействия и изучаемые параметры, протоколы, а также тип информации, извлеченной из эксперимента с микрочипом, отличались от стандартных. Эксперименты с микрочипами ДНК [30,61,64,65].Поэтому MSIV для всех сывороток и пептидов представлены в качестве дополнительного материала (таблица S3 ).

    Статистический анализ

    Для статистического анализа и графического представления результатов использовалась программная среда R (версия R 2.14.1 (08.07.2011) Copyright (C) 2011; ISBN 3-1-08-9; http://CRAN. R-project.org/).

    Чтобы выбрать пептиды, подходящие для серотипирования, и установить индивидуальные пороговые значения для каждого пептида, был проведен анализ рабочих характеристик приемника (ROC) с использованием R-пакета «DiagnosisMed».

    Для выбора на основе ROC пептидов, полученных из полиморфных клональных типоспецифических областей, в качестве «положительного эталонного стандарта» использовались реакции эталонных сывороток, полученных от кошек, инфицированных гомологичным типом T. gondii . Напротив, в качестве «отрицательного эталонного стандарта» использовали отрицательную сыворотку T. gondii и сыворотку кошек, инфицированных гетерологичным клональным типом T. gondii . ROC-анализ был выполнен с использованием этих эталонных стандартов и на основе литературной информации [32,66] пептидов со значением площади под ROC-кривой (AUC) ≥ 0.считалось, что 7 имеют достаточную дискриминационную способность для серотипирования [67]; чем выше AUC, тем лучше пептид различает эталонные положительные и отрицательные сыворотки. ROC-анализ также использовался для определения индивидуальных пептид-специфических порогов, при которых сумма диагностической чувствительности и специфичности для отдельных пептидов достигала своего оптимума, т.е. была максимально высокой. Эти пороговые значения для отдельных пептидов использовались для определения положительных и отрицательных реакций на пептиды, для определения чувствительности и специфичности типирования, а также для определения доли ложноположительных реакций среди T.gondii -положительные эталонные сыворотки кошек, инфицированные гетерологичным типом T. gondii в отношении пептидной специфичности и серологически отрицательные сыворотки кошек. Пептиды с долей ложноположительных реакций среди этих сывороток >45% исключали из дальнейшего анализа. Положительные и отрицательные реакции окончательно отобранных пептидов использовали для дальнейшего анализа частоты и пост-хок-теста (LSD [наименее значимое различие]) анализа ANOVA.

    Частотный анализ (логарифмическая линейная модель, хи-квадрат) для данных серотипирования был выполнен с помощью R-пакета «vcd», который также использовался для визуализации результатов в мозаичных графиках, как описано ранее [28,30,68].

    Реакции сыворотка-пептид (средние значения выборочного индекса, MSIV) были нормализованы по пороговым значениям (CN) путем вычитания специфических для пептидов пороговых значений из MSIV, что привело к значению, называемому CN-MSIV. Это было сделано для лучшей визуализации положительных и отрицательных сывороточно-пептидных реакций, т.е. положительные реакции приводили к значениям ≥ 0, а отрицательные результаты к значениям < 0. Для выполнения множественных сравнений средних значений CN-MSIV между группами пептидов или между отдельными пептидами применялся Post-Hoc-тест (LSD [Least-Significant-Difference]) на ANOVA результаты были применены с использованием R-пакета «agricolae» [30,61].

    Чтобы проанализировать, распознаются ли пептидные паттерны отдельными кластерами сывороток в разных группах, мы провели исследовательский анализ данных с применением метода самоорганизующейся сети Кохонена/самоорганизующихся карт Кохонена (SOM) на основе искусственной нейронной сети [69-72]. В настоящем исследовании мы использовали контролируемый анализ самоорганизующейся сети Кохонена с XY-слиянием, чтобы найти взаимосвязь между входными данными (измерения реакций сыворотки и пептидов и групп пептидов), представленными X-картой, и выходными данными (группы кошачьих сывороток), представленными Y- карта.Анализ контролируемой сети Кохонена с XY-слиянием (XYF-SKN) применялся с использованием R-пакета «kohonen» [69,70]. Мы использовали сетку SOM 4×2 единиц (узлов). Топология сетки была шестиугольной. Полный набор данных был представлен в сети 2000 раз. Для этого анализа использовали реакции пептидов сыворотки с оригинальными MSIV.

    Результаты

    Подтверждение серологического статуса

    T. gondii кошачьей сыворотки

    IFAT использовали для определения серологического статуса кошек.В группе сывороток, считавшихся T. gondii отрицательными (n=52), реципрокные титры IFAT варьировали от <25 до 100. Среди сывороток, считавшихся положительными (n=114), реципрокные титры IFAT варьировали от 200 до 51200 (n=114). Таблица 1 , Таблица S3 ). Результаты IFAT были подтверждены иммуноблоттингом TgSAG1. В 114 из 114 (100%) IFAT-положительных и эталонных сывороток были обнаружены антитела к TgSAG1, в то время как 52 из 52 (100%) IFAT-негативных сывороток поля были отрицательными в иммуноблоте TgSAG1.

    + + 91 885 91 986
    + Взаимное 91 481 токсоплазма МФАТ титр *
    TgSAG1 иммуноблот <25 25 50 100 200 400 800 1600 3200 6400 12800 25600 51200
    Отрицательный 12 25 8 7 0 0 0 0 0 0 0 0 0
    Положительный 0 0 0 0 2 2 5 17 26 15 19 22 6

    Таблица 1.Положительные и отрицательные реакции иммуноблоттинга TgSAG1 в сравнении с реципрокными титрами Toxoplasma gondii IFAT в кошачьей полевой и эталонной сыворотках (n = 166).

    Предсказание 47 новых потенциальных полиморфных эпитопов

    В дополнение к 54 полиморфным пептидам, описанным ранее [10], 47 новых полиморфных, т. е. типоспецифичных, пептидов, полученных из белковых последовательностей GRA5, GRA6, GRA7, SAG2A, были отобраны с использованием метода шкалы склонности для расширения пептидной панели для серотипирования Т.gondii клональных типов с помощью пептидного микрочипа с использованием кошачьей сыворотки.

    На основе белковых последовательностей GRA5, доступных для клональных линий I, II и III, было идентифицировано 9 потенциально типоспецифичных пептидных последовательностей (таблица S1 ). По сравнению с GRA5 типа I (штамм RH) в GRA5 типа II (штамм K76) наблюдали шесть замен аа и три замены аа в GRA5 типа III (штамм VEG) [27]. Все, кроме одной замены аа в GRA5, были расположены в N-концевой гидрофильной области GRA5.Выбранные пептидные последовательности GRA5 не соответствовали всем критериям, указанным в разделе «Материалы и методы» для выбора пептидов (таблица S1 ): остатки пролина отсутствовали во всех пептидных последовательностях GRA5, и только три из выбранных производных GRA5 пептидов мы локализовали в предполагаемых α-спиральных областях (согласно «диаграмме Гарнье-Робсона»). Однако «индекс антигенности Джеймсона-Вольфа» предполагал, что выбранные пептиды были расположены в антигенных областях, а «график поверхностной вероятности Эмини» показал высокую поверхностную вероятность для всех выбранных пептидных последовательностей.Все последовательности были расположены в гидрофильных областях белка GRA5 в соответствии с «графиками гидропатии Кайта-Дулитла» (таблица S1 ).

    В аминокислотных последовательностях GRA6 идентифицировано 21 полиморфное положение. По сравнению с GRA6 типа I (штамм RH) в последовательности белка обнаружено восемь замен аа и шесть вставок аа в типе II (штамм ME49), тогда как в GRA6 типа III (штамм NED) обнаружено семь замен аа. Все пептиды соответствовали большинству критериев отбора (таблица S1 ).Только три пептида располагались в области с α-спиральными свойствами. Пять пептидных последовательностей не содержали остатков пролина. Выбранные пептиды были расположены как на С-, так и на N-концевых участках (таблица S1 ).

    Для GRA7 было выбрано 13 последовательностей полиморфных пептидов. Все пептидные последовательности располагались вблизи С-конца. По сравнению с GRA7 типа I (штамм RH) восемь замен аминокислот наблюдались в типе II (штамм BEVERLEY) и 15 замен аминокислот в типе III (штамм NED) (таблица S1 ).Все пептиды GRA7 были получены из антигенных гидрофильных областей. Они были выбраны из участков, предположительно расположенных на поверхности белка или в предполагаемых α-спиральных участках. В четырех пептидах отсутствовали остатки пролина.

    Для белка SAG2A были выбраны четыре полиморфных пептида из С-концевой области. Выбранные участки пептидов соответствовали критериям антигенности, гидрофильности, поверхностной вероятности и наличию остатков пролина. Однако пептиды не имели α-спиральной структуры (таблица S1 ).Пептиды были получены либо из полиморфного участка белка, общего для клональных типов I и III (штаммы S48, NED), либо из участка, специфичного для клонального типа II (штаммы LGE96-1, BEVERLEY).

    Выбор из 24 пептидов, подходящих для серотипирования

    T. gondii у кошек

    Всего 101 пептид, представляющий одиночные типоспецифические полиморфизмы (I [n=27], II [n=29] и III [n= 21]), а также общие полиморфизмы для двух из трех клональных типов одновременно (I/II [n=6], I/III [n=12], II/III [n=6]).Для отбора пептидов, подходящих для серотипирования T. gondii , отдельные пептиды сначала подвергали ROC-анализу. Те пептиды, для которых ROC-анализ показал диагностическую способность, были дополнительно проанализированы с помощью ANOVA и LSD-Post-Hoc-Test.

    Для каждой группы пептидов, специфичных для определенного клонального типа, в ROC-анализе использовали индивидуальный набор эталонных сывороток, в который вошли сыворотки от T. gondii серологически отрицательных кошек (n=52) и сыворотки от экспериментально инфицированных кошек ( п=21).В отдельных анализах ROC 40 из 101 проанализированного пептида дали значение AUC ≥ 0,7 (таблица S4 ) и, таким образом, были включены во вторую фазу селекции. На этом этапе были исключены пептиды, которые показали долю ложноположительных реакций > 45% либо в сыворотках с отрицательным полем, либо в сыворотках кошек, инфицированных гетерологичным типом T. gondii в отношении специфичности пептида (таблица S4). ). Следующие три пептида были исключены во время анализа ANOVA и LSD-Post-Hoc-Test, поскольку они либо распознавались неспецифически (т.е. показали значительно более высокую интенсивность реакции в гетерологичной или отрицательной сыворотке, чем в сыворотке с гомологичной специфичностью), или не было статистически значимых различий в реактивности между различными группами кошачьих сывороток в соответствии с LSD-Post-Hoc-Test.

    Всего 24 оставшихся пептида распознавались сыворотками с гомологичной специфичностью (таблица S4 ). Диагностическая специфичность с использованием «отрицательного эталонного стандарта», т.е. уровень рестрикции реакций на сыворотки животных, инфицированных клональным типом, гомологичным типоспецифичности аа-последовательности данного индивидуального пептида, ранжировали от 60% до 98%.Доля ложноположительных реакций среди сывороток от животных, инфицированных клональным типом, гетерологичным по типоспецифичности пептида, колебалась от 0% до 44,4% (Таблица S4 ). Доля ложноположительных реакций в серологически отрицательных полевых сыворотках колебалась от 0% до 40,4% (Таблица S4 ). Диагностическая чувствительность с использованием положительной сыворотки от кошек, инфицированных гомологичным типом T. gondii , по отношению к пептидной специфичности колебалась от 5,9% до 100% (таблица S4 ).Пептиды, отобранные для серологического типирования, были получены из белков GRA1, 3, 5, 6, 7 и SAG2A. Девять из 24 пептидов были новыми, а 15 были опубликованы ранее [10]. В пептидной панели, созданной в настоящем исследовании, типоспецифичность была почти одинаково распределена по трем клональным типам T. gondii (тип I: 9 пептидов, тип II: 9 пептидов, тип III: 11 пептидов). Последовательности аа 24 пептидов подробно показали следующие специфичности: тип I (n=4), тип II (n=8), тип III (n=7), тип I/II (n=1) и тип I. /III (n=4).

    Серотипирование у кошек, инфицированных известным

    T. gondii типа
    Кошки, инфицированные клональным типом I.

    Средние значения CN-MSIV, по которым пептиды с последовательностями аа, специфичными для клонального типа I (I, I/II, I/III), распознавались сывороткой кошек, инфицированных клональным типом I (n=17), были значительно выше, чем означают CN-MSIV, с помощью которых пептиды со специфическими типами II или III, т. е. гетерологичными аминокислотными последовательностями, распознавались одной и той же сывороткой (таблица 2 , ANOVA, LSD ≥ 0.523, р-значение <0,05). Пептид GRA3-I/III-28 распознавался значительно более высокими MSIV в этой группе (рис. 1 [A ]), за ним следовали GRA5-I-41 и GRA6-I-216 (ANOVA, LSD ≥ 0,926, р-значение <0,05). Самая низкая специфичная реактивность против клонального типа I наблюдалась для пептида GRA6-I-173 (Фигура 1 ]). Диагностическая чувствительность отдельных пептидов, обладающих клональной специфичностью I типа (I, I/II, I/III), варьировалась от 5,9% до 94,1%, а диагностическая специфичность — от 64.от 2% до 98,2% (таблица S4 ).

    Кошек * (наименее значимые разницы, ЛСД) средства CN-MSIV в пределах пептидных групп (95% CL) **
    I II III I / II I / III
    I ( ≥ 0,523 ) 0,37 (0,008 … 0,81 ) -0,45 (-0,64 … -0.26) -0.87 (-1.09 … 0,65)
  • 0.36 (0,15 … 0.57 ) 0,95 (0,42 … 1.49 )
    II ( ≥ 1.034 ) -1 04 (-1.31 … -0.77 ) 0.79 (0,15 … 1.43 ) -1.12 (-1.70 … -0.54) 0.92 (0.15 … 1.69 ) -1.15 (-1.62 … -0.67)
    III ( ≥ 1,129 ) -0,59 (-1,37…-0,20) -0,29 (-0,97…-0,39) 0 (0…0) -0.27 (0 … 0) 1.55 (0.31 … 2.79 )
    N ( ≥ 0.259 ) -0.73 (-0.84 … -0.61) -0.11 (-0.24 … 0,03 ) -1.19 (-1.33 … 1.05)
  • 0.09 (0,0004 … 0.18 ) -1.08 (-1.27 … -0.89)
    A ( ≥ 0,902 ) -0.23 (-1.01 … 0,54) 0,12 (-0,33…0,57) -0,56 (-0,98…-0,14) 0,05 (0,17…0,28) 2,37 (1.58…3,16 )

    Рисунок 1. У кошек, инфицированных Toxoplasma gondii типа I, реакции на специфические пептиды типа I, I/II и I/III являются наиболее сильными и преобладают по количеству.

    Интенсивность (MSIV), по которой кошки, инфицированные клональным типом I, реагировали на отдельные пептиды, анализировали с использованием ANOVA и теста наименьших значимых различий (LSD)-Post-Hoc-Test (A).Усы представляют 95% доверительные интервалы средних значений MSIV (столбцы). Различия между средними значениями MSIV считались статистически значимыми, если они были равны или превышали значения LSD. Различные буквы над усами указывают на существенные различия между средними значениями интенсивности в LSD-Post-Hoc-Test.

    Чтобы оценить, были ли положительные или отрицательные реакции сыворотки против когорт клональных типоспецифических пептидов чрезмерно или недостаточно представлены у кошек, инфицированных T.gondii клонального типа I был использован логарифмически-линейный модельный анализ, и результаты представлены на мозаичном графике (B). Размер каждого прямоугольника на мозаичном графике соответствует наблюдаемой частоте положительных (Pos) и отрицательных (Neg) пептидных реакций, а также количеству анализируемых пептидов в каждой когорте пептидов. Остатки Пирсона представляют собой стандартизированные отклонения наблюдаемых значений от ожидаемых. Остатки Пирсона 0-2 со сплошной синей линией указывают на то, что количество положительных или отрицательных реакций выше, но не статистически значимо выше, чем ожидалось (Pearson chi-square p-value < 0.1). Оттенки синей шкалы предполагают статистически значимое отклонение нулевой гипотезы, т. Е. Чрезмерное представление реакций против определенных групп пептидов (остатки Пирсона (> 2), p-значение Пирсона хи-квадрат <0,05). Красные пунктирные линии указывают на недопредставленность положительных или отрицательных пептидных реакций, что не является статистически значимым. Затенение красной шкалы предполагает статистически значимое отклонение нулевой гипотезы, то есть недостаточное представление реакций пептидов в анализируемой группе пептидов (остатки Пирсона (<-2) p-значение Пирсона хи-квадрат, 0.05).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0080213.g001

    Распространенность положительных и отрицательных реакций на пептиды сыворотки в группе кошек, инфицированных I типом, анализировали с использованием логарифмической линейной модели. Полученные таблицы сопряженности и отклонения от гипотезы о независимости визуализировались мозаичными графиками (рис. 1 [B ]). Положительные клональные реакции, специфичные для пептидов типа I, были количественно преобладают (остатки Пирсона > 3, значение p < 0.01) среди сывороток кошек, инфицированных I типом T. gondii . Кроме того, пептидные реакции, специфичные для типов I/II и I/III, также были статистически значимо перепредставлены, о чем свидетельствуют остатки Пирсона > 3 (значение p < 0,01). Все положительные пептидные реакции, специфичные для типа II и III, были недопредставлены (остатки Пирсона <-2 и <-3, p-значение <0,05 и 0,01 соответственно) среди сывороток кошек, инфицированных типом I (рис. 1 [B ]).

    Кошки, инфицированные клональным типом II.

    Анализ сыворотки кошек, инфицированных клональным типом II T. gondii (n=3), показал, что пептиды, представляющие специфичные для типа II аа-последовательности (II, I/II), распознавались значительно более высокими средними CN-MSIV по сравнению с к пептидам с гетерологичной специфичностью, т.е. клональным типам I или III (таблица 2 ; ANOVA, LSD ≥ 1,034, p-значение > 0,05). Пептид dGRA6-II-214(9) был распознан по значительно более высокому среднему значению CN-MSIV (Фигура 2 [A ]) по сравнению с остальными пептидами, использованными для серотипирования (ANOVA, LSD ≥ 1.697, р-значение <0,05). Наименьшие средние значения клональных CN-MSIV, специфичных для типа II, наблюдались в GRA7-II-225, SAG2A-II-93 и GRA1-II-159. Пептиды, специфичные к клональному типу I или III, распознавались по заметно более низкой интенсивности по сравнению с пептидами, обладающими специфичностью к клональному типу II (ANOVA, LSD ≥ 1,697, p-значение <0,05) (фигура 2 [A ]). Диагностическая чувствительность пептидов с клональной специфичностью II типа (II, I/II) колебалась от 66,7 до 100 %, а их типирующая специфичность — от 60 до 98 %.6% (Таблица S4 ).

    Рисунок 2. У кошек, инфицированных Toxoplasma gondii типа II, реакции на специфические пептиды типа II и I/II являются наиболее сильными и представлены в большом количестве.

    Интенсивность (MSIV), по которой кошки, инфицированные клональным типом II, реагировали на отдельные пептиды, анализировали с использованием ANOVA и теста наименьших значимых различий (LSD)-Post-Hoc-Test (A). Чтобы оценить, были ли положительные или отрицательные реакции сыворотки против когорт клональных типоспецифических пептидов чрезмерно или недостаточно представлены у кошек, инфицированных T.gondii клонального типа II, был использован логарифмически-линейный модельный анализ, и результаты представлены на мозаичном графике (B).

    Подробные пояснения [A] и [B] приведены на рис. 1.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0080213.g002

    Оценка распространенности положительных реакций на пептиды с помощью лог-линейного моделирования показала статистически значимое преобладание клонального типа II- (остатки Пирсона > 3, p- значение <0,01), а также клональные пептидные реакции, специфичные для I/II типа (остатки Пирсона > 1, p-значение <0.1). Напротив, реакции на пептиды с последовательностями, специфичными для клонального типа I или III, были недостаточно представлены (остатки Пирсона <-1, p-значение <0,1) у кошек, инфицированных клональным типом II T. gondii (рис. 2 В ]).

    Кошка, инфицированная клоном III типа.

    Значительно более высокие CN-MSIV сыворотки от кошки, инфицированной клональным типом III T. gondii , наблюдались в пептидах со специфичными последовательностями аа типа I/III, за которыми следовали CN-MSIV, наблюдаемые в группе клональных пептиды, специфичные для типа III (таблица 2 , ANOVA, LSD ≥ 1.128604, р-значение <0,05). Самые высокие CN-MSIV наблюдались у пептидов GRA3 I/III-189, GRA3-I/III-28 и GRA6-I/III-220. Все пептиды с клональными последовательностями, специфичными для типа III, были признаны положительными, но реакции были близки к пороговым значениям, характерным для пептидов (Фигура 3 [A ]).

    Рисунок 3. У кошки, инфицированной Toxoplasma gondii типа III, специфические пептиды типов III и I/III были признаны наиболее сильными и представлены в большом количестве.

    Интенсивность (MSIV), по которой кошки, инфицированные клональным типом III, реагировали на отдельные пептиды, анализировали с использованием ANOVA и теста наименьших значимых различий (LSD)-Post-Hoc-Test (A). Чтобы оценить, были ли положительные или отрицательные реакции сыворотки против когорт клональных типоспецифических пептидов чрезмерно или недостаточно представлены у кошки, инфицированной T. gondii клонального типа III, был использован анализ логарифмической линейной модели, а результаты представлены на мозаичном графике. (Б).

    Подробные пояснения [A] и [B] уже приведены на рисунке 1.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0080213.g003

    Четыре пептида с гетерологичной специфичностью (GRA7-II-225, GRA6-I-216 и SAG2A-II-131) также были распознаны сывороткой. Однако MSIV, зарегистрированные для этих пептидов, были заметно ниже (Фигура 3 [A ]) по сравнению с пептидами с гомологичной специфичностью аа-последовательности.

    Поскольку была доступна только одна эталонная сыворотка, специфичная для клонального III, было невозможно создать статистически значимую логарифмически-линейную модель распространенности положительных или отрицательных пептидных реакций.Тем не менее, положительные реакции на пептиды, специфичные для клонального типа III, а также I/III, были количественно чрезмерно представлены (остатки Пирсона > 1, p-значение <0,1), в то время как положительные реакции на клональные типы I, II и I/II специфичны. пептиды были недостаточно представлены (Фигура 3 [B ]).

    У кошек, инфицированных естественным путем, преобладают клональные реакции II типа

    Сыворотки, собранные естественным путем от T. gondii серопозитивных кошек из Германии (n=86), показали самые сильные реакции (т.е. наиболее высокие CN-MSIV) с пептидами аминокислотных последовательностей, гомологичных клональному типу II (II и I/II), по сравнению с реакциями с пептидами клональных типов I- или III-специфических аминокислотных последовательностей (таблица 2 ; ANOVA, LSD ≥ 0,259 , р-значение <0,05).

    Самые высокие значения CN-MSIV наблюдались для пептида SAG2A-II-93, за которым следовали SAG2A-II-135 и GRA7-II-225, которые также распознавались по значительно более высоким положительным показателям CN-MSVI по сравнению с большинством остальных пептидов, включая GRA5. -III-34 и GRA7-I/II-193 и GRA6-I/III-220 (ANOVA, LSD ≥ 0.454, p-значение <0,05) (рисунок 4 [A ]).

    Рисунок 4. У естественных Toxoplasma gondii серопозитивных кошек самые сильные реакции наблюдались против пептидов, специфичных для типа II и I/II, и реакции против этих пептидов были представлены чаще всего.

    Интенсивность (MSIV), с которой естественно инфицированные кошки реагировали на отдельные пептиды, была проанализирована с использованием ANOVA и Апостериорного теста наименьших значимых различий (LSD) (A). Чтобы оценить, были ли положительные или отрицательные реакции сыворотки против когорт клональных типоспецифических пептидов чрезмерно или недостаточно представлены в естественных условиях T.gondii -инфицированных кошек, был проведен анализ логарифмической модели, и результаты представлены в виде мозаичного графика (B).

    Подробные пояснения [A] и [B] уже даны на рисунке 1.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0080213.g004

    SAG2A-II-93 был пептидом, распознаваемым наибольшим количеством T. gondii серопозитивных полевых сывороток (n=67, [77,9%] ), за которым следуют SAG2A-II-135 (n = 60 [69,7%]), GRA7-II-225 (n = 40, [46,5%]) и SAG2A-II-131 (n = 26, [30.2%]) (Таблица S4 ).

    Лог-линейный модельный анализ показал, что реакции с пептидами, демонстрирующими клональные последовательности аа, специфичные для типа II (II, I/II), были статистически значимо преувеличены (остатки Пирсона > 3,1, хи-квадрат p-значения < 0,01) (Рисунок 4 [B ]), в то время как положительные клональные пептидные реакции, специфичные для I или III типа, были значительно недопредставлены (остатки Пирсона <2,1, p-значение хи-квадрат <0,05 (рис. 4 [B ]).

    Кошки, инфицированные неканоническими

    T. gondii , распознают в основном специфические пептиды типа I/III

    Кошки, инфицированные неканоническим T. gondii , продемонстрировали самые сильные реакции, т. е. самые высокие средние значения CN-MSIV, против пептидов, представляющих последовательности аа, специфичные для типа I и III (таблица 2 ; пептиды типа I/III). Статистически значимых различий не наблюдалось среди групп пептидов, специфичных для клонального типа I, II, III и I/II (таблица 2 ; ANOVA, LSD ≥ 0.9, р-значение <0,05).

    пептида GRA3-I/III-28 и SAG2A-I/III-131 были признаны с самыми высокими средними значениями CN-MSIV. Более низкие CN-MSIV наблюдались в SAG2A-II-131, GRA3-I/III-189, GRA5-I-41 и GRA6-I/III-220; однако различия в интенсивности реакции не были статистически значимыми по сравнению с таковыми против GRA3-I/III-28 и SAG2A-I/III-131. Остальные пептиды распознавались в среднем по значительно более низким значениям индекса (LSD ≥ 1,704, p-значение <0,05) (Фигура 5 [A ]).

    Рисунок 5. У кошек, инфицированных неканонической Toxoplasma gondii , наиболее сильные реакции наблюдались против специфических пептидов типа I/III, и количество реакций против этих пептидов было завышенным.

    Интенсивность (MSIV), с которой кошки, инфицированные неканоническим типом, реагировали на отдельные пептиды, была проанализирована с использованием ANOVA и Post-Hoc-теста наименьших значимых различий (LSD) (A). Чтобы оценить, были ли положительные или отрицательные реакции сыворотки против когорт клональных типоспецифических пептидов чрезмерно или недостаточно представлены у кошек, инфицированных атипичным T.gondii был использован логарифмически-линейный модельный анализ, и результаты представлены на мозаичном графике (B).

    Подробные пояснения [A] и [B] уже даны на рисунке 1.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0080213.g005

    Пептид GRA3-I/III-189 распознавался всеми сыворотками (100%), а 6 из 7 сывороток (86%) обнаруживали SAG2A-I /III-131 и GRA3-I/III-28 (Таблица S4 ).

    Лог-линейный анализ положительных и отрицательных пептидных реакций среди клональных типоспецифичных пептидов показал, что реакции с пептидами, содержащими последовательности, специфичные как для типа I, так и для типа III, были статистически значимо завышены (остатки Пирсона >3, p-значение <0.01), в то время как реакции пептидов, специфичных для клональных типов I и III, были недостаточно представлены (остатки Пирсона <-1, p-значение <0,1). Не наблюдалось существенных различий в частоте положительных и отрицательных реакций среди когорт клональных пептидов типа II и I/II (остатки Пирсона -1 < 0 < 1, p-значение > 0,1) (рис. 5 [B ]).

    Естественно серопозитивные кошки объединяются с кошками, инфицированными II типом, в контролируемой сети Кохонена с XY-слиянием

    Каждая тестируемая сыворотка распознавала несколько пептидов с разными MSIV.Чтобы обнаружить сходство между протестированными сыворотками в распознаваемых пептидных структурах, был проведен исследовательский анализ данных с использованием контролируемой сети Кохонена с XY-слиянием (XYF-SKN).

    Y-карта СКН представлена ​​на рисунке 6 [A ], где сыворотки от пяти кошачьих групп (т.е. три группы, состоящие из эталонных сывороток для типа I, II или III, одна группа сывороток от не- кошек, инфицированных каноническим типом, и одну группу сывороток от кошек, инфицированных естественным путем T.gondii ) сгруппированы в соответствии с их сходством по реактивности пептидов.

    Рисунок 6. Естественно Toxoplasma gondii серопозитивные кошки и кошки с известной клональной инфекцией типа II распознавали сходные пептидные структуры.

    Чтобы выяснить, существуют ли определенные закономерности антипептидных реакций среди всех серологически положительных T. gondii кошачьих сывороток, был проведен XY-слитный анализ самоорганизующейся сети Кохонена (XYF-SKN). На рисунке (А) представлена ​​кластеризация различных групп T.gondii положительная кошачья сыворотка на Y-карте. Большая часть сывороток получена от кошек, инфицированных неканоническими типами T. gondii (A), инфицированных клональными типами I, II или III (I, II или III), или кошек, инфицированных естественным путем (N), сгруппированных в узлы сетки от 1 до 8 либо вместе (зараженные III и атипичным типами [узел 4 ], а также кошки II типа и естественно инфицированные [узлы 1 до 3 и 6 до 8 ]) или отдельно (кошки, инфицированные Т. I типа ).gondii [узел 5 ]). Три группы кошек были предсказаны с использованием XYF-SKN, например. группа кошек, инфицированных неканоническими штаммами T. gondii типа III ( A ), группа кошек, инфицированных клональным типом I ( I ), и группа кошек, инфицированных естественным путем ( N ). Прогнозируемые группы кошек представлены разными цветами фона узлов сетки, например. g A красного цвета, I зеленого цвета и N синего цвета.На рисунке (B) показано количество групповых сывороток в пределах предсказанных кластеров ( A , I и N ), что дополнительно подтверждает, что сыворотки кошек, инфицированных естественным путем, группировались в основном с эталонными сыворотками типа II. На рисунке (C) показано количество специфичных для группы сывороток в восьми узлах сетки на рисунке (A).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0080213.g006

    XYF-SKN классификационный анализ сывороточно-пептидных реакций предсказал три группы кошек, состоящие в основном из животных, инфицированных неканоническим и клональным типом III T.Gondii ( A , красный), клональный тип I ( I , зеленый) или с естественной инфекцией ( N , синий) (рисунок 6 [A ] В ]). Группа N (Рисунок 6 [A ] , [B ], синий) состояла из шести узлов (1-3 и 6-8) с 85 (98,8%) сыворотками естественно инфицированных кошек и всех трех сывороток от кошек, инфицированных T. gondii типа II. Три сыворотки от кошек, инфицированных T.gondii клонального типа I и две сыворотки, полученные от кошек, инфицированных неканоническим T. gondii , также попали в эту группу. Вторая группа I (рис. 6 [A ] , [B ], зеленый) состояла из одного узла сетки (5) с 11 сыворотками типа I и одной сывороткой от естественно инфицированного Кот. Третья группа A (Рисунок 6 [A ], красный) также состояла из одного узла сетки (4) с пятью сыворотками от кошек, инфицированных неканоническим T.gondii , три сыворотки кошек, инфицированных I типом, и одна сыворотка кошек, инфицированных I типом.

    Почти все сыворотки от кошек, инфицированных клональными типами I (n=11) и III (n=1), сгруппированы в одну единицу (узел сетки 5 ) (Рисунок 6 [C ]). Две оставшиеся сыворотки типа I были сгруппированы вместе с 15 сыворотками, полученными от естественно серопозитивных кошек, в узел сетки 1 (Фигура 6 [A ] , [C ]).Оставшуюся сыворотку типа I и четыре сыворотки от естественно серопозитивных кошек помещали в узел сетки 2 (рис. 6 [A ] , [C ]).

    Сыворотка кошки, инфицированной II типом, сгруппирована в узле сетки 3 вместе с 8,1% (n=7) сыворотки, полученной от естественно серопозитивных кошек, отобранных в Германии (Рисунок 6 [A ] , [С ]). Вторая специфичная для типа II сыворотка была сгруппирована с 36.04% (n=31) сыворотки, полученной от естественно серопозитивных кошек, отобранных в Германии, и две сыворотки от кошек, инфицированных неканоническим T. gondii в узле сетки 6 (рис. 6 [A ] , [C ]). Сыворотка третьего типа II была отсортирована вместе с 27,9% (n = 24) T. gondii -положительных кошачьих полевых сывороток в узлы сетки 7 (рис. ]).

    Остальные 5 из 7 сывороток, собранных у кошек, инфицированных неканоническим T.gondii сгруппированы отдельно в узле сетки 4 вместе с одной сывороткой кошки, инфицированной клональным типом III, и тремя сыворотками кошек, инфицированных T. gondii клонального типа I (рис. 6 [A ] , [C ]).

    В узле сетки 8 присутствовали только сыворотки естественно серопозитивных кошек (n=4) (Рисунок 6 [A ] , [C ]).

    Обсуждение

    Несколько исследований, проведенных с человеческой и мышиной сывороткой, показали, что гуморальный ответ против T.gondii частично специфичен для клонального типа паразита [10,31]. На основании этих результатов были разработаны неинвазивные методы типирования с использованием синтетических пептидов или рекомбинантных полипептидов в серотипирующих ИФА или микрочипах для исследования наличия антител к конкретным клональным типам T. gondii у инфицированных людей и животных [10,27, 30,31,43,73]. Насколько нам известно, нет опубликованной информации об ответе клональных типоспецифических антител на T.gondii и серотипирование у кошек, хотя кошки играют важную роль в качестве важного окончательного хозяина в эпидемиологии инфекции T. gondii .

    Наличие сыворотки от лиц с известным клональным типом инфекции T. gondii является необходимым условием для разработки инструментов серотипирования. Поскольку сыворотки людей с известным клональным типом инфекции T. gondii встречаются очень редко, сыворотки инфицированных мышей использовали для оценки пептидов, которые, возможно, подходили для серотипирования с помощью сывороток человека [10].К счастью, мы смогли использовать несколько сывороток от экспериментально инфицированных кошек для оценки пептидов-кандидатов, т.е. для идентификации тех пептидов, которые показали оптимальную специфичность для серотипирования инфекций канонического типа T. gondii .

    Некоторые из экспериментально инфицированных кошек, сыворотки которых были предоставлены для настоящего исследования, изначально использовались для получения ооцист, и поэтому им перорально вводили тканевые цисты. Следует ожидать, что этот путь заражения не только индуцировал развитие кишечных стадий, таких как шизонты, а затем и гамонты, но и вызывал появление внекишечных стадий, таких как тахизоиты и брадизоиты [39].Как следствие, у кошек, выделяющих ооцисты, часто развивается длительный гуморальный иммунный ответ против тахизоитов и брадизоитов. Полученные антитела можно использовать для серотипирования для определения клонального типа инфекции T. gondii у отдельных кошек. Поскольку сероконверсия к T. gondii обычно является постоянной, типирование возможно не только у кошек, фактически выделяющих ооцисты (в Европе лишь небольшая часть, менее 1% всех кошек [21]), но также и у подавляющего большинства животных, которые заразился T.gondii в прошлом, но не выделяли ооцисты или не проверялись на выделение ооцист при обескровливании. Таким образом, серотипирование может позволить получить менее предвзятое представление о клональных типах T. gondii , циркулирующих в популяции кошек, по сравнению с генотипированием, которое обязательно ограничено очень небольшой частью популяции кошек.

    В настоящем исследовании мы проанализировали в общей сложности 101 полиморфных пептидов T. gondii , то есть пептидов с последовательностями аа, специфичными для клонального типа, для идентификации молекул, подходящих для серотипирования T.gondii у кошек. Для подбора соответствующих пептидов, т.е. пептидов с оптимальной специфичностью и чувствительностью, использовали сыворотки от экспериментально инфицированных кошек или кошек, у которых был определен тип заражающего T. gondii , а также серонегативных кошек. Из этих 101 пептида 54 ранее были охарактеризованы для серотипирования T. gondii у людей [10]. Было показано, что пятнадцать из 54 пептидов, взятых из литературы, реагируют клонально-специфическим образом с кошачьей сывороткой.Еще 47 пептидов были отобраны для настоящего исследования с использованием биоинформатического подхода, в котором применялся метод шкалы склонности [74]. Двадцать один из 47 (44,7%) пептидов, предсказанных с помощью этого подхода, показал диагностическую способность (значение AUC ≥ 0,7 в ROC-анализе). Однако только 9 из этих 47 (19,1%) пептидов распознавались клонально-типоспецифическим образом кошачьей сывороткой. Пептиды, полученные из GRA5, не соответствовали всем критериям метода шкалы склонности. Несмотря на это, успех правильного предсказания линейных В-клеточных эпитопов был сходным для пептидов GRA5; я.5 из 9 (55,6 %) пептидов GRA5 проявляли диагностическую способность, и только 2 из 9 (22,2 %) пептидов GRA5 распознавались клонально-типоспецифическим образом. Это иллюстрирует недостаточную эффективность подхода шкалы предрасположенности к выбору подходящих пептидов и подтверждает результаты предыдущих исследований [75-77].

    Интересно, что мы обнаружили, что пептиды, ранее описанные как подходящие для серотипирования T. gondii у людей и мышей [10,30,78], также можно использовать с кошачьей сывороткой.Очевидно, такие пептиды содержат клональные типоспецифические эпитопы, которые распознаются антителами, продуцируемыми широким спектром видов позвоночных, включая людей, мышей и кошек, а также, возможно, другими промежуточными хозяевами T. gondii . Кроме того, эти результаты показывают, что ресурсы, доступные как в человеческой, так и в ветеринарной медицине, могут быть широко использованы для повышения чувствительности и специфичности серологических тестов, например. тесты на серотипирование. Однако большое количество пептидов показало низкую специфичность к клональному типу у кошек, хотя их аа-последовательности указывали на специфичность к клональному типу, и поэтому не были включены в окончательную панель пептидов для серотипирования.Сходные результаты были получены при валидации пептидов с полиморфными эпитопами сывороткой мышей [10]. Низкая типоспецифичность отдельных пептидов может быть объяснена сильной иммунореактивностью неполиморфных частей этих пептидов. Дальнейшее уточнение таких пептидов, т.е. варьирование длины их неполиморфных частей может способствовать достижению типоспецифической реактивности [10].

    Наши эксперименты привели к обнаружению 24 пептидов, считающихся подходящими для типирования канонических клональных типов T.gondii инфекции у кошек с использованием сыворотки, полученной от этих животных.

    Не было контрольной сыворотки от кошек, инфицированных каноническими клональными типами, которые не распознавали бы пептиды, представляющие эпитопы с гомологичной специфичностью для тех типов T. gondii , которыми были инфицированы кошки. Таким образом, мы считаем, что эта панель полиморфных, клональных типоспецифических пептидов может быть использована для эпидемиологических исследований у кошек в районах, где преобладают канонические типы T. gondii , т.е.е. в Европе и Северной Америке. Мы применили пептидную панель для определения распределения клональных типов инфекции T. gondii среди естественно серопозитивных кошек из Европы на основе ДНК из ооцист естественно инфицированных кошек [20,21]. Таким образом, генотипирование и серотипирование можно сравнивать у кошек из одного и того же региона.

    Результаты серотипирования естественно серопозитивных кошек показали, что клональные пептиды, специфичные для типа II, распознавались значительно более высокими MSIV по сравнению с пептидами с другой специфичностью последовательности.Более того, реакции с пептидами сыворотки, специфичные для II типа, были значительно преобладают по сравнению с реакциями с остальными группами пептидов. Исследовательский анализ данных с использованием предсказания XYF-SKN показал, что 98,8% сывороток (85/86), полученных от естественно серопозитивных кошек, сгруппированы в одну группу и распознают сходные пептидные паттерны с кошками с известной инфекцией T. gondii типа II, т.е. собраны вместе с сыворотками из одной группы ( N ), но в 6 разных узлах, что предполагает небольшие различия в том, в каких пептидах распознавались.Четыре пептида со специфическими последовательностями аа типа II, распознаваемыми полевой сывороткой, также распознавались кошками с подтвержденной или экспериментальной инфекцией T. gondii типа II. Однако в случае пептида SAG2A-II-93 реакции у кошек с подтвержденной или экспериментальной инфекцией типа II были близки к пороговому значению, в то время как полевые сыворотки сильно реагировали на SAG2A-II-93. Этому наблюдению могли способствовать различия в экспрессии SAG2A между полевыми и лабораторными штаммами, использованными для экспериментального заражения в настоящем исследовании, различия в стадии инфекции между полевыми и лабораторными кошками или генетические факторы хозяина.Таким образом, основываясь на результатах серотипирования, вполне вероятно, что большинство естественно серопозитивных кошек из Германии были инфицированы T. gondii типа II , что согласуется с результатами генотипирования, полученными с ДНК из ооцист, выделяемых кошками [20,21]. ] и с результатами серотипирования T. gondii , проведенными с сывороткой человека из Германии [30].

    Хотя в анализе XYF-SKN естественно серопозитивные кошки были в основном распределены по узлам, содержащим сыворотку от кошек, инфицированных типом II, также несколько сывороток от кошек, инфицированных клональным типом I (n=3), или кошек, инфицированных неканоническим T .gondii типа (n=2) были отсортированы по этим узлам. Кроме того, несколько сывороток от кошек, экспериментально инфицированных штаммами типа I (3/16), типа III (n=1/1) и атипичными (5/7) штаммами, сгруппированы вместе в одном узле в предсказании XYF-SKN, т.е. не могут быть четко отделены друг от друга серотипированием. Эти результаты показывают ограничения серотипирования. Как показано в таблице S4 , специфичность некоторых пептидов для целей типирования ограничена, и можно предположить, что ложноположительные реакции могут возникать в неполиморфных, но также и в полиморфных (т.е. специфические для клонального типа) области пептидов. Эти неспецифические реакции в дополнение к низкому количеству реактивных пептидов могли быть связаны с неспособностью дифференцировать кошек, инфицированных каноническими и атипичными штаммами. Кроме того, представляется невозможным однозначно идентифицировать смешанные инфекции, поскольку реакции с пептидами с различной типоспецифичностью могут быть вызваны инфекциями более чем одного типа (т. е. смешанными инфекциями или суперинфекцией) или инфекцией нетипичный штамм.

    Предыдущие результаты генотипирования показали, что смешанные или суперинфекции более чем одним каноническим типом T. gondii могут возникать у кошек в естественных условиях [23,35], но информации об ожидаемой частоте нет. Можно предположить, что смешанная или суперинфекция может быть более вероятной в районах, где сосуществует более одного из канонических типов T. gondii . Поскольку инфекция у кошек, по-видимому, явно зависит от возраста [79], ограничение серотипирования молодыми кошками (возраст ≤ 2 лет) может быть целесообразным для снижения риска неправильной классификации из-за смешанной или суперинфекции в эпидемиологических исследованиях.

    Соуза и др. (2008) [29] сообщили о серотипировании людей, инфицированных неканоническими типами T. gondii из Африки и Южной Америки, с использованием пептидов, полученных из клональных II- и I/III-специфичных полиморфных областей белка GRA6. Большинство этих сывороток человека распознавали в основном клональный пептид GRA6 типа I/III [29]. В настоящем исследовании мы серотипировали кошек, инфицированных неканоническим T. gondii из Бразилии (TgCatBr1, 2, 5) и Северной Америки (TgBbUS1 и TgGoatUS6).Интересно, что эти сыворотки также распознавали клональные пептиды, специфичные для типа I/III, со значительно более высокими средними значениями MSIV, а количество положительных реакций на пептиды типа I/III было значительно избыточно представлено в этих сыворотках. Также наблюдались сильные реакции с отдельными пептидами, специфичными для клональных типов I, II или III. Сильный ответ IgG против пептидов, специфичных для типа II или типа I/III, у кошек, инфицированных неканоническим T. gondii , может указывать на то, что особенно белки с эпитопами, общими для типа II или I/III, экспрессируются этими неканоническими пептидами. -канонические штаммы.Поскольку последовательности белков из этих атипичных изолятов T. gondii недоступны, проверить эту гипотезу не представлялось возможным. Хотя кошки, инфицированные атипичным T. gondii , сильно реагировали на пептиды, специфичные одновременно для типов I и III (т. Рисунок 6 ). Это открытие дает уверенность в том, что наш анализ серотипирования смог бы обнаружить во время полевых исследований популяцию кошек с неканоническим T.gondii инфекции. Однако как смешанные инфекции, так и инфекции неканоническими или атипичными штаммами (как показано в настоящем исследовании) могут вызывать ответ антител, реагирующий с отдельными пептидами, содержащими эпитопы, специфичные для канонических типов T. gondii . Поэтому результаты серотипирования следует анализировать с осторожностью, чтобы избежать неправильного толкования. Поэтому мы предлагаем серотипирование в качестве эпидемиологического инструмента для типирования в районах, где преобладают канонические T. gondii -инфекции, но не как инструмент для типирования отдельных кошек.

    В заключение, в настоящем исследовании мы показали, что у кошек вырабатывается гуморальный ответ, специфичный для клонального типа T. gondii , и идентифицировали 24 пептида, подходящих для серотипирования T. gondii у кошек. Наши результаты показывают, что большинство T. gondii серопозитивных кошек в Германии инфицированы T. gondii типа II . Этот вывод согласуется с предыдущими данными о преобладании типа II T. gondii в ооцистах, выделяемых кошками в Германии [20] и с T.gondii серотипирования у людей из Германии, что также свидетельствует о преобладании инфекций типа II [30]. Дальнейшие исследования с большим числом четко определенных сывороток могут помочь улучшить оценку полиморфных пептидов и идентифицировать больше пептидов, подходящих для серотипирования T. gondii у кошек.

    Благодарности

    Мы признательны Андреа Бервальд, Лизелотте Минке и Роберту Карусу за отличную техническую помощь.

    Авторские взносы

    Задумал и спроектировал эксперименты: PM JZ UR MS FJC GS.Выполняли эксперименты: PM JPD CFF AM MH GS. Проанализированы данные: ПМ УР МЗ ГС. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты анализа: JZ JPD NP CFF MH UR MS FJC GS. Написал рукопись: PM FJC GS.

    Каталожные номера

    1. 1. Dabritz HA, Conrad PA (2010) Кошки и токсоплазма : значение для общественного здравоохранения. Зоонозы. Общественное здравоохранение 57: 34-52.
    2. 2. Элмор С.А., Джонс Дж.Л., Конрад П.А., Паттон С., Линдси Д.С. и соавт. (2010) Toxoplasma gondii : эпидемиология, кошачьи клинические аспекты и профилактика.Тенденции Параситол 26: 190-196. doi: https://doi.org/10.1016/j.pt.2010.01.009. PubMed: 20202907.
    3. 3. Su C, Khan A, Zhou P, Majumdar D, Ajzenberg D et al. (2012) Глобально разнообразные изоляты Toxoplasma gondii включают шесть основных клад, происходящих от небольшого числа различных предковых линий. Proc Natl Acad Sci USA 109: 5844-5849. doi: https://doi.org/10.1073/pnas.12031
    4. . PubMed: 22431627.
    5. 4. Su C, Zhang X, Dubey JP (2006) Генотипирование Toxoplasma gondii с помощью мультилокусных маркеров ПЦР-ПДРФ: простой метод идентификации паразитов с высоким разрешением.Int J Parasitol 36: 841-848. doi: https://doi.org/10.1016/j.ijpara.2006.03.003. PubMed: 16643922.
    6. 5. Херрманн Д.С., Барвальд А., Максимов А., Панчев Н., Врховец М.Г. и соавт. (2012) Toxoplasma gondii половое скрещивание в одном естественно инфицированном кошачьем хозяине: образование высоковирулентных и авирулентных клонов для мышей, генотипически отличающихся от клональных типов I, II и. III. Вет Рез 43: 39.
    7. 6. Ajzenberg D, Bañuls AL, Su C, Dumètre A, Demar M et al.(2004) Генетическое разнообразие, клональность и сексуальность у Toxoplasma gondii . Int J Parasitol 34: 1185-1196. doi: https://doi.org/10.1016/j.ijpara.2004.06.007. PubMed: 15380690.
    8. 7. Айзенберг Д. (2011) Нерешенные вопросы о самом успешном известном паразите. Expert Rev Anti Infect Ther 9: 169-171. doi: https://doi.org/10.1586/eri.10.169. PubMed: 21342063.
    9. 8. Дубремец Дж. Ф., Лебрен М. (2012) Факторы вирулентности Toxoplasma gondii .Микробы заражают 14: 1403-1410. doi: https://doi.org/10.1016/j.micinf.2012.09.005. PubMed: 23006855.
    10. 9. Маклеод Р., Бойер К.М., Ли Д., Муи Э., Вроблевски К. и др. (2012) Недоношенность и тяжесть заболевания связаны с аллелями Toxoplasma gondii (NCCCTS, 1981–2009). Clin Infect Dis 54: 1595-1605. doi: https://doi.org/10.1093/cid/cis258. PubMed: 22499837.
    11. 10. Kong JT, Grigg ME, Uyetake L, Parmley S, Boothroyd JC (2003)Серотипирование инфекций Toxoplasma gondii у людей с использованием синтетических пептидов.J Infect Dis 187: 1484-1495. дои: https://doi.org/10.1086/374647. PubMed: 12717631.
    12. 11. Ajzenberg D, Cogné N, Paris L, Bessières MH, Thulliez P et al. (2002) Генотип 86 изолятов Toxoplasma gondii , связанных с врожденным токсоплазмозом человека, и корреляция с клиническими данными. J Infect Dis 186: 684-689. дои: https://doi.org/10.1086/342663. PubMed: 12195356.
    13. 12. Boothroyd JC, Grigg ME (2002) Популяционная биология Toxoplasma gondii и ее отношение к инфекциям человека: разные штаммы вызывают разные заболевания? Curr Opin Microbiol 5: 438-442.doi: https://doi.org/10.1016/S1369-5274(02)00349-1. PubMed: 12160866.
    14. 13. Джеймисон С.Е., Пейшото-Рангель А.Л., Харгрейв А.С., Рубе Л.А., Муи Э.Дж. и др. (2010) Доказательства связи между пуринергическим рецептором P2X(7) (P2RX7) и токсоплазмозом. Гены Иммун 11: 374-383. doi: https://doi.org/10.1038/gene.2010.31. PubMed: 20535134.
    15. 14. Джеймисон С.Э., Корделл Х., Петерсен Э., Маклеод Р., Гилберт Р.Э. и соавт. (2009)Генетические и эпигенетические факторы хозяина при токсоплазмозе.Мем Инст Освальдо Круз 104: 162-169. doi: https://doi.org/10.1590/S0074-0276200
    16. 00006. PubMed: 19430638.
    17. 15. Джеймисон С.Е., де Рубе Л.А., Кортина-Борха М., Тан Х.К., Муи Э.Дж. и др. (2008)Генетические и эпигенетические факторы при COL2A1 и ABCA4 влияют на клинический исход при врожденном токсоплазмозе. ПЛОС ОДИН 3: e2285. doi: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0002285. PubMed: 18523590.
    18. 16. Gilbert RE, Freeman K, Lago EG, Bahia-Oliveira LM, Tan HK et al. (2008)Окулярные последствия врожденного токсоплазмоза в Бразилии по сравнению с Европой.PLoS Negl Trop. Drosophila Inf Serv 2: e277.
    19. 17. Феккар А., Айзенберг Д., Бодаги Б., Туафек Ф., Ле Хоанг П. и др. (2011)Прямое генотипирование Toxoplasma gondii в образцах глазной жидкости 20 пациентов с глазным токсоплазмозом: преобладание типа II во Франции. J Clin Microbiol 49: 1513-1517. doi: https://doi.org/10.1128/JCM.02196-10. PubMed: 21248092.
    20. 18. Демар М., Хоммель Д., Джоссу Ф., Пено С., Бухари Р. и другие. (2012)Острые токсоплазмозы у иммунокомпетентных пациентов, госпитализированных в отделение интенсивной терапии во Французской Гвиане.Clin Microbiol Infect 18: E221-E231. doi: https://doi.org/10.1111/j.1469-0691.2011.03648.x. PubMed: 21958195.
    21. 19. Grigg ME, Ganatra J, Boothroyd JC, Margolis TP (2001)Необычное обилие атипичных штаммов, связанных с токсоплазмозом глаз человека. J Infect Dis 184: 633-639. дои: https://doi.org/10.1086/322800. PubMed: 11474426.
    22. 20. Herrmann DC, Pantchev N, Vrhovec MG, Barutzki D, Wilking H et al. (2010) Атипичные генотипы Toxoplasma gondii , выявленные в ооцистах, выделяемых кошками в Германии.Int J Parasitol 40: 285-292. doi: https://doi.org/10.1016/j.ijpara.2009.08.001. PubMed: 19695254.
    23. 21. Шарес Г., Врховец М.Г., Панчев Н., Херрманн Д.К., Конратс Ф.Дж. (2008)Присутствие ооцист Toxoplasma gondii и Hammondia hammondi в фекалиях кошек из Германии и других европейских стран. Вет Паразитол 152: 34-45. doi: https://doi.org/10.1016/j.vetpar.2007.12.004. PubMed: 18226453.
    24. 22. Херрманн Д.С., Максимов П., Максимов А., Сутор А., Шварц С. и соавт.(2012) Toxoplasma gondii у лисиц и грызунов из немецких федеральных земель Бранденбург и Саксония-Анхальт: серопревалентность и генотипы. Вет Паразитол 185: 78-85. doi: https://doi.org/10.1016/j.vetpar.2011.10.030. PubMed: 22105083.
    25. 23. Аль-Каппани Ю.М., Раджендран С., Абу-Эльвафа С.А., Хилали М., Су С. и другие. (2010) Генетическое разнообразие изолятов Toxoplasma gondii у египетских диких кошек выявляет новые генотипы. Дж Параситол 96: 1112-1114.doi: https://doi.org/10.1645/GE-2608.1. PubMed: 21158618.
    26. 24. Аль-Каппани Ю.М., Раджендран С., Феррейра Л.Р., Квок О.С., Абу-Эльвафа С.А. и другие. (2010) Высокая распространенность токсоплазмоза у кошек из Египта: выделение жизнеспособных Toxoplasma gondii , распределение в тканях и обозначение изолята. Дж Параситол 96: 1115-1118. doi: https://doi.org/10.1645/GE-2554.1. PubMed: 21158619.
    27. 25. Пармли С.Ф., Гросс У., Сухарчук А., Виндек Т., Сгарлато Г.Д. и соавт.(1994) Два аллеля гена, кодирующего поверхностный антиген Р22, у 25 штаммов Toxoplasma gondii . Дж Параситол 80: 293-301. дои: https://doi.org/10.2307/3283761. PubMed: 7

      7.
    28. 26. Dubey JP (2008) История Toxoplasma gondii — первые 100 лет. JEukaryot Microbiol 55: 467-475. doi: https://doi.org/10.1111/j.1550-7408.2008.00345.x. PubMed: 1
    29. 91.
    30. 27. Пейрон Ф., Лобри Дж. Р., Мюссе К., Феррандис Дж., Гомес-Марин Дж. Э. и др.(2006)Серотипирование Toxoplasma gondii у хронически инфицированных беременных женщин: преобладание типа II в Европе и типов I и III в Колумбии (Южная Америка). Микробы заражают 8: 2333-2340. doi: https://doi.org/10.1016/j.micinf.2006.03.023. PubMed: 16938480.
    31. 28. Мориссет С., Пейрон Ф., Лобри Дж. Р., Гарвег Дж., Феррандис Дж. и др. (2008) Серотипирование Toxoplasma gondii : поразительная однородная картина между симптоматическими и бессимптомными инфекциями в Европе и Южной Америке.Микробы заражают 10: 742-747. doi: https://doi.org/10.1016/j.micinf.2008.04.001. PubMed: 18539501.
    32. 29. Sousa S, Ajzenberg D, Vilanova M, Costa J, Dardé ML (2008)Использование синтетических полиморфных пептидов, полученных из GRA6, в иммуноферментном анализе серотипа Toxoplasma gondii в образцах сыворотки человека, собранных с трех континентов. Clin Vaccine Immunol 15: 1380-1386. doi: https://doi.org/10.1128/CVI.00186-08. PubMed: 18667636.
    33. 30. Максимов П., Зервек Дж., Максимов А., Хотоп А., Гросс Ю. и др.(2012) Анализ реакций клональных типоспецифических антител у Toxoplasma gondii серопозитивных людей из Германии с помощью Peptide-Microarray. ПЛОС ОДИН 7: e34212. doi: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0034212. PubMed: 22470537.
    34. 31. Xiao J, Buka SL, Cannon TD, Suzuki Y, Viscidi RP и др. (2009)Серологическая картина, соответствующая инфекции типа I Toxoplasma gondii у матерей и риском развития психоза у взрослого потомства.Микробы заражают 11: 1011-1018. doi: https://doi.org/10.1016/j.micinf.2009.07.007. PubMed: 19638313.
    35. 32. Конратс Ф.Дж., Шарес Г. (2006) Валидация методов молекулярной диагностики в паразитологической лаборатории. Вет Паразитол 136: 91-98. doi: https://doi.org/10.1016/j.vetpar.2005.12.004. PubMed: 16414191.
    36. 33. Dubey JP (2004)Токсоплазмоз — зооноз, передающийся через воду. Вет Паразитол 126: 57-72. doi: https://doi.org/10.1016/j.vetpar.2004.09.005. ПабМед: 15567579.
    37. 34. Chen ZW, Gao JM, Huo XX, Wang L, Yu L et al. (2011) Генотипирование изолятов Toxoplasma gondii от кошек в различных географических регионах Китая. Вет Паразитол, 183: 166–70. PubMed: 21757292.
    38. 35. Дубей Дж. П., Моура Л., Маджумдар Д., Сундар Н., Велмуруган Г. В. и соавт. (2009) Выделение и характеристика жизнеспособных изолятов Toxoplasma gondii выявили возможную высокую частоту смешанной инфекции у диких кошек ( Felis domesticus ) из ​​Сент-Китс, Вест-Индия.Паразитология 136: 589-594. doi: https://doi.org/10.1017/S00311820015. PubMed: 19402949.
    39. 36. Дубей Дж. П., Квирк Т., Питт Дж. А., Сундар Н., Велмуруган Г. В. и другие. (2008) Изоляция и генетическая характеристика Toxoplasma Gondii от енотов ( Procyon Lotor ), Cats ( Feleis ), Полосатый скунс ( Mephite Mephite ), черный медведь ( Ursus americanus ) и пума ( Puma concolor ) из ​​Канады.Дж Параситол 94: 42-45. doi: https://doi.org/10.1645/GE-1349.1. PubMed: 18372620.
    40. 37. Монтойя А., Миро Г., Матео М., Рамирес С., Фуэнтес И. (2009) Обнаружение Toxoplasma gondii у кошек путем сравнения биоанализа на мышах и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Вет Паразитол 160: 159-162. doi: https://doi.org/10.1016/j.vetpar.2008.10.029. PubMed: 1

      00.

    41. 38. Dubey JP (1996) Инфекционность и патогенность Toxoplasma gondii ооцист для кошек.Дж. Паразитол 82: 957-961. дои: https://doi.org/10.2307/3284206. PubMed: 8973406.
    42. 39. Dubey JP (1995) Продолжительность иммунитета к выделению ооцист Toxoplasma gondii кошками. Дж Параситол 81: 410-415. дои: https://doi.org/10.2307/3283823. PubMed: 7776126.
    43. 40. Але-Давуд С.Дж. Джавазаде Блури А., Садеги Х., Сабзгабайе М.А.М., Латифи С.М. и др. (2006) Подготовка этических кодексов для исследований на лабораторных животных. J Babol Univ Med Sci 8: 55-64.
    44. 41. Hosseininejad M (2012)Оценка непрямого ИФА с использованием тахизоитного поверхностного антигена SAG1 для диагностики инфекции Toxoplasma gondii у кошек. Опыт Паразитол 132: 556-560. doi: https://doi.org/10.1016/j.exppara.2012.09.009. PubMed: 23010568.
    45. 42. Fazaeli A, Carter PE, Darde ML, Pennington TH (2000)Молекулярное типирование штаммов Toxoplasma gondii с помощью анализа последовательности гена GRA6. Int J Parasitol 30: 637-642.doi: https://doi.org/10.1016/S0020-7519(00)00036-9. PubMed: 10779578.
    46. 43. Соуза С., Айзенберг Д., Марле М., Обер Д., Виллена И. и др. (2009)Выбор полиморфных пептидов из последовательностей GRA6 и GRA7 штаммов Toxoplasma gondii для использования в серотипировании. Clin Vaccine Immunol 16: 1158-1169. doi: https://doi.org/10.1128/CVI.00092-09. PubMed: 19494084.
    47. 44. Fischer HG, Stachelhaus S, Sahm M, Meyer HE, Reichmann G (1998) GRA7, экскреторный антиген 29 кДа Toxoplasma gondii , высвобождаемый инфицированными клетками-хозяевами.Мол Биохим Паразитол 91: 251-262. doi: https://doi.org/10.1016/S0166-6851(97)00227-2. PubMed: 9566518.
    48. 45. Фазаэли А., Эбрахимзаде А. (2007)Новый взгляд на локус SAG2 и его переоценка в качестве инструмента для генетического анализа изолятов Toxoplasma gondii . Паразитол Рез 101: 99-104. doi: https://doi.org/10.1007/s00436-006-0449-8. PubMed: 17297630.
    49. 46. Lehmann T, Blackston CR, Parmley SF, Remington JS, Dubey JP (2000) Типирование штаммов Toxoplasma gondii : сравнение генов, кодирующих антиген, и генов домашнего хозяйства.Дж. Параситол 86: 960-971. doi: https://doi.org/10.1645/0022-3395(2000)086[0960:STOTGC]2.0.CO;2. PubMed: 11128519.
    50. 47. Garnier J, Osguthorpe DJ, Robson B (1978) Анализ точности и применения простых методов для предсказания вторичной структуры глобулярных белков. Дж. Мол Биол 120: 97-120. doi: https://doi.org/10.1016/0022-2836(78)-8. PubMed: 642007.
    51. 48. Kyte J, Doolittle RF (1982) Простой метод отображения гидропатического характера белка.Дж. Мол. Биол. 157: 105-132. doi: https://doi.org/10.1016/0022-2836(82)

      -0. PubMed: 7108955.

    52. 49. Джеймсон Б.А., Вольф Х. (1988)Антигенный индекс: новый алгоритм прогнозирования антигенных детерминант. Comput Appl Biosci 4: 181-186. PubMed: 2454713.
    53. 50. Эмини Э.А., Хьюз Дж.В., Перлоу Д.С., Богер Дж. (1985)Индукция антител, нейтрализующих вирус гепатита А, вирус-специфическим синтетическим пептидом. Дж. Вирол 55: 836-839. PubMed: 29

      .
    54. 51. Spycher A, Geigy C, Howard J, Posthaus H, Gendron K et al.(2011)Выделение и генотипирование Toxoplasma gondii , вызывающего фатальный системный токсоплазмоз у иммунокомпетентной 10-летней кошки. J Vet Diagn Invest 23: 104-108. doi: https://doi.org/10.1177/104063871102300117. PubMed: 21217037.
    55. 52. Dubey JP, Desmonts G (1987) Серологические реакции непарнокопытных, которых кормили Toxoplasma gondii ооцистами. Ветеринар по лошадям J 19: 337-339. doi: https://doi.org/10.1111/j.2042-3306.1987.tb01426.x. ПабМед: 3622463.
    56. 53. Дубей Дж. П., Моралес Дж. А., Сундар Н., Вельмуруган Г. В., Гонсалес-Баррьентос К. Р. и др. (2007) Выделение и генетическая характеристика Toxoplasma gondii от полосатого дельфина ( Stenella coeruleoalba ) из ​​Коста-Рики. Дж Параситол 93: 710-711. doi: https://doi.org/10.1645/GE-1120R.1. PubMed: 17626370.
    57. 54. Лунде М.Н., Джейкобс Л. (1983) Антигенные различия между эндозоитами и цистозоитами Toxoplasma gondii .Дж Параситол 69: 806-808. дои: https://doi.org/10.2307/3281034. PubMed: 6200590.
    58. 55. Howe DK, Sibley LD (1995) Toxoplasma gondii включает три клональные линии: корреляция генотипа паразита с заболеванием человека. J Infect Dis 172: 1561-1566. doi: https://doi.org/10.1093/infdis/172.6.1561. PubMed: 7594717.
    59. 56. Дубей Дж. П., Наварро ИТ, Шрикумар С., Даль Э., Фрейре Р.Л. и другие. (2004) Toxoplasma gondii инфекции у кошек из Параны, Бразилия: серопревалентность, распределение в тканях, биологическая и генетическая характеристика изолятов.Дж Параситол 90: 721-726. doi: https://doi.org/10.1645/GE-382R. PubMed: 15359466.
    60. 57. Дубей Дж. П., Раджендран С., Феррейра Л. Р., Квок О. С., Синнетт Д. и другие. (2010) Новый атипичный высоковирулентный генотип Toxoplasma gondii , выделенный от дикого черного медведя на Аляске. Дж Параситол 96: 713-716. doi: https://doi.org/10.1645/GE-2429.1. PubMed: 20486739.
    61. 58. Максимов П., Буштёнс С., Херрманн Д.С., Конратс Ф.Дж., Гёрлих К. и др. (2011) Серологическое исследование и факторы риска для Toxoplasma gondii у домашних уток и гусей в Нижней Саксонии, Германия.Вет Паразитол 182: 140-149. doi: https://doi.org/10.1016/j.vetpar.2011.05.049. PubMed: 21719198.
    62. 59. Шарес Г., Петерс М., Вурм Р., Бервальд А., Конратс Ф.Дж. (1998) Эффективность вертикальной передачи Neospora caninum у молочного скота проанализирована серологическими методами. Вет Паразитол 80: 87-98. doi: https://doi.org/10.1016/S0304-4017(98)00195-2. PubMed: 9870361.
    63. 60. Азеведо С.С., Пена Х.Ф., Алвес С.Дж., Гимарайнш Филью А.А., Оливейра Р.М. и др.(2010)Распространенность антител против Toxoplasma gondii и против Neospora caninum у свиней из Северо-Восточной Бразилии. Rev Bras Parasitol Vet 19: 80-84. doi: https://doi.org/10.4322/rbpv.01

      2. PubMed: 20624342.
    64. 61. Максимов П., Зервек Дж., Максимов А., Хотоп А., Гросс Ю. и др. (2012) Анализ пептидных микрочипов в silico — предсказанные эпитопы для серологической диагностики инфекции Toxoplasma gondii у людей. Clin Vaccine Immunol 19: 865-874.doi: https://doi.org/10.1128/CVI.00119-12. PubMed: 22496494.
    65. 62. Нахтман Т., Джернберг А., Махдавифар С., Зервек Дж., Шутковски М. и другие. (2007)Подтверждение экспериментов с микрочипами пептидных эпитопов и извлечение данных о качестве. J Immunol Methods 328: 1-13. doi: https://doi.org/10.1016/j.jim.2007.07.015. PubMed: 17765917.
    66. 63. Нго И., Адвани Р., Валентини Д., Гасейциве С., Махдавифар С. и др. (2009)Идентификация и тестирование контрольных пептидов для антигенных микрочипов.J Immunol Methods 343: 68-78. doi: https://doi.org/10.1016/j.jim.2008.12.004. PubMed: 1

      32.
    67. 64. Pamelard F, Even G, Apostol C, Preda C, Dhaenens C et al. (2009) PASE: веб-платформа для экспериментов с пептидными/белковыми микрочипами. Методы Мол Биол 570: 413-430. doi: https://doi.org/10.1007/978-1-60327-394-7_24. PubMed: 19649610.
    68. 65. Виджил А., Ортега Р., Джайн А., Накадзима-Сасаки Р., Тан Х и др. (2010) Идентификация кошачьего гуморального иммунного ответа на инфекцию Bartonella henselae с помощью белкового микрочипа.ПЛОС ОДИН 5: e11447. doi: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0011447. PubMed: 20625509.
    69. 66. де Кок Дж. Б., Верхаг Г. В., Рулофс Р. В., Хесселс Д., Кимени Л. А. и соавт. (2002) DD3(PCA3), очень чувствительный и специфичный маркер для выявления опухолей предстательной железы. Рак Res 62: 2695-2698. PubMed: 11980670.
    70. 67. Цвейг М.Х., Кэмпбелл Г. (1993) Графики рабочих характеристик приемника (ROC): фундаментальный инструмент оценки в клинической медицине. Clin Chem 39: 561-577. ПабМед: 8472349.
    71. 68. Мейер Д., Зейлейс А., Хорник К. (2006) Структура структуры: визуализация многосторонних таблиц непредвиденных обстоятельств с помощью VCD. Программное обеспечение J Stat 17.
    72. 69. Buydens LMC, Wehrens R (2007) Самоорганизующиеся и суперорганизующие карты в R: пакет kohonen. Программное обеспечение J Stat 21.
    73. 70. Melssen W, Wehrens R, Buydens L (2006) Контролируемые сети Кохонена для задач классификации 83. Chemometr Intell Lab. стр. 99-113.
    74. 71. Törönen P, Kolehmainen M, Wong G, Castrén E (1999) Анализ данных об экспрессии генов с использованием самоорганизующихся карт.FEBS Lett 451: 142-146. doi: https://doi.org/10.1016/S0014-5793(99)00524-4. PubMed: 10371154.
    75. 72. Wang J, Delabie J, Aasheim H, Smeland E, Myklebost O (2002) Кластеризация SOM легко выявляет различные модели экспрессии генов: результаты повторного анализа исследования лимфомы. BMC Bioinformatics 3: 36. doi: https://doi.org/10.1186/1471-2105-3-36. PubMed: 12445336.
    76. 73. Sousa S, Canada N, Correia da Costa JM, Dardé ML (2010)Серотипирование естественно зараженных Toxoplasma gondii мясных животных.Вет Паразитол 169: 24-28. doi: https://doi.org/10.1016/j.vetpar.2009.12.025. PubMed: 20083355.
    77. 74. El-Manzalawy Y, Honavar V (2010)Последние достижения в методах прогнозирования эпитопов B-клеток. Immunome Res 6 Suppl 2: S2. doi: https://doi.org/10.1186/1745-7580-6-2. PubMed: 21067544.
    78. 75. Блайт М.Дж., Флауэр Д.Р. (2005) Сравнительный анализ предсказания эпитопов В-клеток: недостаточная эффективность существующих методов. Белковая наука 14: 246-248. PubMed: 15576553.
    79. 76. Lin SY, Cheng CW, Su EC (2013)Предсказание эпитопов B-клеток с использованием эволюционной информации и шкал склонности.BMC Биоинформатика 14: S10. doi: https://doi.org/10.1186/1471-2105-14-10. PubMed: 23484214.
    80. 77. Рубинштейн Н.Д., Мэйроуз И., Пупко Т. (2009)Подход машинного обучения для прогнозирования эпитопов В-клеток. Мол Иммунол 46: 840-847. doi: https://doi.org/10.1016/j.molimm.2008.09.009. PubMed: 18947876.
    81. 78. Новаковска Д., Колон И., Ремингтон Дж. С., Григг М., Голаб Э. и др. (2006) Генотипирование Toxoplasma gondii с помощью мультиплексной ПЦР и серологического тестирования образцов от младенцев в Польше с диагнозом врожденный токсоплазмоз.